化学发光测定TSH的实验评价及其临床应用

 　作者：王志刚　吴晓燕　毕平安　程巧群

　摘要　用“第三代”化学发光免疫分析“夹心法”，评估化学发光检测TSH的实验性能。结果显示该法精密度：批内与批间CV分别为2.08～2.74%与3.85～4.43%。回收率100.6%，灵敏度0.01 mIU/L，交叉污染率＜0.01%，与RIA法对比试验Y＝0.8942X+0.2031(r＝0.9867)。因此，化学发光法具高灵敏度和高特异性，使测得的TSH量不但能区分甲减，且能用于诊断甲亢，甚至亚临床型或潜在型甲状腺功能亢进或减退。 
　　关键词　化学发光免疫分析　　促甲状腺激素　　甲亢　　甲减

　　TSH是由垂体前叶S细胞合成与分泌，并受下丘脑-垂体-甲状腺轴的调控。该轴失衡导致TSH和甲状腺激素含量的变化，并出现相应的临床体症。常用检测法中，RIA的灵敏度为1.5 mIU/L，免疫放射法(IRIA)灵敏度为0.1～0.5 mIU/L［1］。现报道应用化学发光免疫分析(CLIA)测定TSH的实验评价和临床应用。

材料和方法

　　一、　仪器和试剂　使用Access化学发光分析仪(美国Beckman公司)和CLIA试剂由日本第一化学药品株式会社提供。RIA法试剂由中国原子能科学研究院提供。通过FMJ全自动γ计数仪测定。 
　　二、　标本　选用疑似有甲状腺疾患者血清为受检标本，实验评价血清为新鲜混合血清或定标血清。 
　　三、　方法　取110 μl血清，加入抗TSH IgG与磁性铁珠载体结合，再加ALP标记的单克隆抗TSH抗体，37 ℃温育45 min，用缓冲液洗三次，加入发光剂PPD［4-甲氧基-4-(3-磷酸苯酯)-螺(1，2-二氧杂环丁烷-3，2′-三环癸烷)磷酸钠］在ALP的作用下，脱去磷酸发射光子，测定其光子量与标准曲线对比。

结　　果

　　一、　线性试验　取一高浓度血清(S5＝100 mIU/L)稀释成浓度梯度。线性范围与相关性试验表明线性范围为0.02～80.56 mIU/L，回归方程：Y＝0.9433X+0.2075，r＝0.9942。 
　　二、　精密度试验　取1.56，5.62，12.65 mIU/L三份不同浓度的混合血清，各重复测定20次，批内精密度CV值分别为2.74%，2.35%，2.08%。每天一次共10天，批间精密度CV值为4.43%，4.02%，3.82%。 
　　三、　回收率试验　取两份混合血清分别进行内加入法，测得回收率分别为100.3%与100.9%，平均100.6%。 
　　四、　灵敏度试验　将S1＝0.1 mIU/L稀释成0.01，0.02，0.04 mIU/L，每天测定一次，共20天，测得批间CV值分别为17.62%，16.32%，12.01%，均小于20%。 
　　五、　交叉污染试验　取S5＝100 mIU/L与S1＝0.1 mIU/L，分别测三次高浓度者(H)后测三次低浓度者(L)，共重复五遍，按［L1-L3）／（H3-L3）］×100%［2，3］算得交叉污染率＜0.01%。 
　　六、　干扰试验　在TSH浓度为4.0 mIU/L的情况下，hCG,LH,FSH浓度分别在250000 U/L，1000 U/L，1000 U/L，对TSH的测定无明显干扰［4］。 
　　七、　对比试验　81份血清标本，分别用CLIA法(Y)与RIA(X)测定TSH进行对比试验，去除超范围者，Y＝0.8942X+0.2031，r＝0.9867。临床CLIA法测定FT3、FT4、TT3、TT4增高的甲亢患者31例，TSH均显示阳性指标(TSH＜0.53 mIU/L)。 
　　八、　临床应用　对原发性甲亢，甲减，甲亢药物治疗者及甲亢手术后复查者等共562例，同时测定TT3、TT4、TSH、FT3、FT4五项。TSH值低下者189例(33.6%)，其中168例有甲亢史或临床症状。其他四项均增高97例，TT3、FT3、FT4增高19例，FT3、FT4增高17例。肝硬化患者TSH下降伴FT3、TT3下降3例。对10例单纯TSH下降者中，7例为甲亢用药者，3例在以后的跟踪复检中证实为亚临床或潜在型甲亢。45例(8.0%) TSH值升高，其中18例TT4、FT4下降，6例仅FT4下降，3例其他四项均下降，2例TT3、TT4、FT4下降。按病史分析，原发性甲亢或甲减，TSH的升高或降低与其他甲状腺激素的升降较有规律。经药物治疗者，不乏有甲亢转为甲减者。动态观察发现，经抗甲状腺药治疗者，各激素的变化程序依次为FT4、TT4、FT3、TT3、TSH。

讨　　论

　　CLIA是一种性能颇佳的新方法，其高灵敏度，高精密度，低交叉污染率已达到“第三代”TSH方法学技术指标。用直径4 μm的磁性包被珠，扩大免疫反应面与底物发光面积，用碱性磷酸酶标记(相当于10－21mol/L的酶)，PPD为底物，其测定灵敏度整体达10－12g水平。本文实验结果表明测TSH灵敏度＜0.01 mIU/L，而RIA测定TSH灵敏度为1.5 mIU/L，参考值＜12.5 mIU/L，对甲亢无诊断意义。 
　　以CLIA测定TSH，该指标不仅可用于传统的甲减诊断，而更多地用于诊断甲亢。同时TSH是甲亢病人药物治疗的良好跟踪指标。临床应用表明CLIA诊断甲亢的阳性率指标从高到低依次为TSH、FT3、FT4、TT3、TT4。诊断甲减的阳性率指标依次为FT4、TSH、TT4、FT3、TT3。TT4的测定结果易受蛋白含量的影响，FT3、FT4测定需加蛋白分离剂，分离的纯度直接影响到极微量FT3、FT4的测定结果，而TSH的测定，运用单克隆抗体，增加了反应的特异性。 
　　总之，用CLIA法测定TSH，不但对甲减，甲亢有明确诊断作用，而且对亚临床型甲亢，甲减有提示作用，对药物治疗有指导作用，对垂体性疾病或甲状腺抵抗综合症具有协助诊断作用，因而具有极高的临床应用价值。

参　考文献

［1］　冯凭.甲状腺疾病．天津科技翻译出版社，1995∶32 
［2］　Danier J,Kerry L, Peter G, et al. An improved automated immunochemiluminometric third generation hTSH assay for the ACCESS immunoassay system. Clin Chem, 1996;42∶S170 
［3］　Sadler W, Murray L, Juner J, et al. Influence of specimen carryover on sensitive thyrotropin (TSH) assay: is there a problem.Clin Chem, 1996;42∶593 
［4］　Pilar S, Aurelin Q, Jose M, et al. New immunoelectro-chemiluminometric assay to measure serum thyrotropin. Clin Chem, 1997;43∶2428

王志刚（浙江省嘉兴市第二医院　314000） 吴晓燕（浙江省嘉兴市第二医院　314000） 
毕平安（浙江省嘉兴市第二医院　314000） 程巧群（浙江省嘉兴市第二医院　314000）