化学因素对微生物的影响测定

实验方法原理 为了比较各种化学消毒剂的杀菌能力，常以石炭酸为标准，即将某一消毒剂作不同稀释后，在一定条件下，一定时间内致死全部供试微生物的最高稀释浓度，与达到同样效果的石炭酸的最高稀释度的比值，称为这种消毒剂对该种微生物的石炭酸系数（酚系数）。石炭酸系数越大，说明该消毒剂杀菌能力越强。

实验材料 大肠杆菌白色葡萄球菌

试剂、试剂盒 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基碘酒升汞石炭酸酒精来苏尔新洁尔灭 龙胆紫龙胆紫

仪器、耗材 培养皿滤纸片试管吸管

实验步骤

1.  各种化学药品的杀菌作用

（1）用无菌吸管吸取培养18小时的白色葡萄球菌菌液0.2 ml 于无菌平皿内。

（2）倒入已溶化并冷至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基于上述平皿内，充分摇匀，水平放置，待凝。

（3）将上述已凝固的平皿用记号笔在平皿底划成八等份，每一等份内标明一种药物的名称。

（4）用无菌镊子将小圆形滤纸片分别浸入各种药品中，取出，并在试管内壁上除去多余药液后，以无菌操作将纸片对号放入培养皿的小区内。

（5）将上述放好滤纸片的含菌平皿，倒置于37℃温室中培养24小时后，取出测定抑菌圈大小，并说明其杀菌强弱。

2.  石炭酸系数的测定

（1）将5%（1：20）的石炭酸液按表Ⅸ-1配成不同浓度，每管5 ml。

（2）将待测药物（来苏尔）先配成1：20的原液，再按表Ⅸ-2配成不同浓度，每管5 ml。

（3）取肉膏蛋白胨液体培养基30管，1~15管标明石炭酸的5种浓度，每种浓度3管，每3管分5、10、15分钟处理，16~30管标明来苏尔的5种浓度，同样每种浓度3管，每3管分5、10、15分钟处理。

（4）在上述不同浓度的石炭酸和来苏尔溶液中，各接入0.5 ml 大肠杆菌液，摇匀。注意每管自接种时起在5、10、15分钟，用同一接种环从各管内取一环接入上述已标记的液体培养基试管中。

（5）置37℃温室中培养48小时，观察并记录生长情况。生长者溶液混浊，以“+”表示；不生长者溶液澄清，以“-”表示。

（6）计算系数值找出在5分钟生长，而在10分钟和15分钟均不生长的石炭酸及来苏尔的最大稀释度，计算二者的比值。例如石炭酸在10分钟内杀死大肠杆菌的最大稀释度是1：70，来苏尔是1：250，则来苏尔的石炭酸系数为250/70=3.6。

3.  结果

（1）各种化学药品对白色葡萄球菌的致死能力

（2）石炭酸系数的测定和计算