化学因素对微生物的影响

实验概要

1．了解常用化学药品对微生物的作用。
2．学习测定石炭酸系数的方法。

实验原理

常用的化学消毒剂主要有重金属及其盐类，酚、醇、醛等有机化合物以及碘、表面活性剂等。它们的杀菌或抑菌作用主要是使菌体蛋白质变性，或者与酶的—SH基结合而使酶失去活性所致。

　　
本实验是观察某些常用的化学药品在一定浓度下对微生物的致死或抑菌作用，从而了解它们的杀菌或抑菌性能。

　　
为了比较各种化学消毒剂的杀菌能力，常以石炭酸为标准，即将某一消毒剂作不同稀释后，在一定条件下，一定时间内致死全部供试微生物的最高稀释浓度，与达到同样效果的石炭酸的最高稀释度的比值，称为这种消毒剂对该种微生物的石炭酸系数（酚系数）。石炭酸系数越大，说明该消毒剂杀菌能力越强。

主要试剂

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，2．5％碘酒，0．1％升汞（HgCl2），5％石炭酸，75％酒精，1％来苏尔，0．25％新洁尔灭， 0．005％龙胆紫，0．05％龙胆紫；

主要设备

培养皿，滤纸片，试管，吸管等。

实验材料

大肠杆菌，白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）；

实验步骤

1．各种化学药品的杀菌作用

　　(1)用无菌吸管吸取培养18小时的白色葡萄球菌菌液0．2ml于无菌平皿内。

　　(2)倒入已溶化并冷至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基于上述平皿内，充分摇匀，水平放置，待凝。

　　(3)将上述已凝固的平皿用记号笔在平皿底划成八等份，每一等份内标明一种药物的名称。

　　(4)用无菌镊子将小圆形滤纸片分别浸入各种药品中，取出，并在试管内壁上除去多余药液后，以无菌操作将纸片对号放入培养皿的小区内，如图Ⅸ-1。

　　(5)将上述放好滤纸片的含菌平皿，倒置于37℃温室中培养24小时后，取出测定抑菌圈大小，并说明其杀菌强弱。

　　
2．石炭酸系数的测定

　　（1）将5％（1：20）的石炭酸液按表Ⅸ-1配成不同浓度，每管5ml。

　　（2）将待测药物（来苏尔）先配成1：20的原液，再按表Ⅸ-2配成不同浓度，每管 5ml。
 

　　 （3）取肉膏蛋白胨液体培养基30管，1—15管标明石炭酸的5种浓度，每种浓度3管，每3管分5、10、15分钟处理，16—30管标明来苏尔的5种浓度，同样每种浓度3管，每3管分5、10、15分钟处理。

　　 （4）在上述不同浓度的石炭酸和来苏尔溶液中，各接入0．5ml大肠杆菌液，摇匀。注意每管自接种时起在5、10、15分钟，用同一接种环从各管内取一环接入上述已标记的液体培养基试管中。
 

　　（5）置37℃温室中培养 48小时，观察并记录生长情况。生长者溶液混浊，以“ ”表示；不生长者溶液澄清，以“-”表示。

　　（6）计算系数值 找出在5分钟生长，而在10分钟和15分钟均不生长的石炭酸及来苏尔的最大稀释度，计算二者的比值。例如石炭酸在10分钟内杀死大肠杆菌的最大稀释度是1：70，来苏尔是1：250，则来苏尔的石炭酸系数为250/70=3．6。

结果　

（1）各种化学药品对白色葡萄球菌的致死能力

       
　　
(2)石炭酸系数的测定和计算

       

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