十大畅销，大分子药物占80％，你的制药方案够全面吗？

　　抗体药经过 30 余年的发展，已成为全球医药市场的重要组成部分，目前大分子生物制药市场（包括重组蛋白类药物）急速增长已突破千万亿美元。从 2017 年市场表现来看，全球 10 大最畅销药物中：除 2 个小分子药物以外，另外 8 个都是大分子药物，包括 6 个抗体药物和 2 个融合蛋白。其中药王“Humira”销售额高达 184 亿美元，上市 16 年来累计为 Abbvie 贡献了 1120 亿美元销售额。

　　近年来新型肿瘤免疫调节抗体药物（如 PD-1/PD-L1 阻断剂）的兴起也带来了新的治疗突破，其中由 BMS 研发的第一个针对 PD-1 的治疗型抗体 Opdivo，以近 60 亿美元上榜前 10 名。

(以上销售数据来源于网络)

　　在药物研发方向，生物大分子药物市场高度集中，巨头垄断地位“超然”，而同时生物制药市场也孕育着诸多新机会和变化，新靶点、新作用机制的抗体药层出不穷，研发企业在生物制药领域大有可为。针对生物大分子制药研发流程的每一个环节，珀金埃尔默公司可提供覆盖分子-细胞-活体-组织的全方位检测技术、仪器平台、试剂耗材及相关服务。

　　针对杂交瘤、噬菌体或人源 B 细胞等不同文库的抗体筛选，高通量多模式检测系统、多标试剂（如高灵敏度免洗 Alpha 技术）及细胞株、高内涵细胞显微成像系统、自动化样品处理工作站可以在分子及细胞水平提供最佳的高通量抗体筛选及优化方案。对于抗体药物的临床前/临床功能验证、安全评价及治疗效果，可借助生化检测及分子影像学平台，完成从分子机制、细胞信号通路、组织微环境及整体动物水平的系统评价。

　　针对抗体工艺开发及生产质控过程中的抗体纯度、糖基化、片段化/聚合化、荷电异质性及宿主细胞残留等重要质控指标，全自动毛细管电泳抗体分析系统和多模式检测及专业试剂盒可大大降低该环节的技术成本。另外，随着医疗大数据时代的到来，珀金埃尔默 Signal 数据挖掘分析系统，结合高质量显微成像技术和数字定量病理智能算法，为基础研究到临床实践的转化进一步助力加速。

　　该应用方案将涵盖：

　　● 体外抗体高通量筛选及优化

　　● 体外抗体功能性评价及研究

　　● 动物活体水平抗体治疗评价

　　● 临床组织病理抗体诊断治疗

体外抗体高通量筛选及优化

　　*部分摘录

　　抗体筛选方法学对比及检测

　　抗体的筛选鉴定中，最经典的方法是 ELISA 方法，通过将抗原包被到微孔板中，加入待测抗体（杂交瘤上清或噬菌体裂解液），经孵育后洗去非结合抗体，再加入检测抗体进行评价。ELISA 方法的需要固定抗原，反复洗板去除多余的抗原/抗体，步骤繁琐，检测动态范围低，且不利于微型化，并且对于一些膜蛋白靶点，抗原固定化后会影响其天然构象及表位，阻碍对针对天然表位的有效抗体的发现及研发。

　　*部分摘录

　　人源 B 细胞抗体整合方案实例

　　人源 B 细胞抗体筛选是一种新型的人源化抗体筛选平台，特别是针对感染性疾病研究，人源 B 细胞抗体筛选具有天然宿主优势。美国 AIMM Therapeutics 公司建立了人源 B 细胞培养、抗体筛选、B 细胞克隆鉴定及中和性抗体功能性验证平台，筛选中和性抗体用于治疗梭状芽孢杆菌（C. difficile）感染引起的结肠炎。

体外抗体功能性评价及研究

　　*部分摘录

　　免疫细胞对肿瘤细胞杀伤活性检测

　　（ADCC/ADCP/CDC）实例：罗氏集团的科研团队在 2016 年 PLos ONE 杂志上发表的文章中，使用高内涵系统 Operetta 对 CD44 治疗抗体介导的巨噬细胞吞噬过程，进行了长达 10 个小时的实时检测（如下图）。图中绿色为 CMFDA Green 标记的肿瘤细胞，黄色为 CMTMR Orange 标记的巨噬细胞，图中白色箭头处可观察到被巨噬细胞吞噬的肿瘤细胞，通过 Harmony 分析软件可对连续观测的图像进行定量分析，以实时比对 CD44 抗体处理组与空白组相比巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤效果。

　　*部分摘录

　　基于 QbD 原则的单抗药物高效工艺开发

　　于生物制品的特殊性，在抗体筛选、优化过程中，除了关注其各项生物学、免疫学特性，更需充分理解环境、工艺步骤及过程对产品纯度、杂质及各项理化特性的影响，以保障最终产品的质量可控。因此，FDA 提出的 QbD（Quality by Design）原则，我国的《生物类似药研发与评价技术指导原则》也对抗体药物的工艺开发提出了更高的要求。由此，高通量、微量化的表达、纯化及分析检测技术，成为高效、可靠、快速、节省的抗体药研发必不可少的工具。

动物活体水平抗体治疗评价

　　*部分摘录

　　小动物光学成像技术在活体水平对药物研发的应用

　　主要可以分为以下 3 个方向：

　　● 建立疾病动物模型，对肿瘤、炎症、感染性疾病、神经性疾病等的治疗药物进行药效学评价；

　　● 对治疗药物在动物体内的靶向分布、组织代谢及降解过程等进行研究；

　　● 对治疗药物进行整体动物毒性及毒理机制研究。

　　*部分摘录

　　免疫检验点抗体药物联合治疗研究实例

　　Michael Lim 等人在 2017 年 Clinical Cancer Research 杂志上的文章中，首次使用 PD-1 阻断抗体、TIM-3 阻断抗体和传统放疗（stereotactic radiosurgery, SRS） 三种方式联合，在小鼠神经胶质瘤模型上，评价不同组合联合治疗的效果，如下图数据所示，使用三种方式联合治疗能显著提高小鼠的生存时间，并且通过 IVIS 成像系统检测发现，第 14 天以后治疗组已检测不到 GL261-luc2 细胞的生物发光信号。

临床组织病理抗体诊断治疗案

　　*部分摘录

　　Phenoptics™ 组织微环境景观分析方案

　　Phenoptics™ 组织微环境景观分析方案是珀金埃尔默推出的新型定量病理分析技术，借助多色标记免疫荧光染色、光谱成像信号拆分和智能定量病理分析三方面的技术突破，实现了组织原位的多标记定量统计分析，将组织形态学和表型识别统计完美的融合在一起，在肿瘤免疫和肿瘤微环境研究中有着重要的意义和应用前景。

　　*部分摘录

　　TMA 八色复染评测肿瘤微环境实例

　　使用多色免疫荧光 Opal™ 染色技术，可对 TMA 样品进行免疫检验点 PD-1、PD-L1、OX40、CD27、TIM、CD3、肿瘤标志物和 DAPI 等八种颜色同时复染，与传统三色以内 IHC 方法相比，可在有限临床样本内，获得更多、更准确的有效信息（下图 A）。对 TMA 复染样品进行多光谱成像及智能定量分析后，得到不同类型肿瘤患者的免疫检验点蛋白表达谱，这些信息是接受免疫检验点抗体药物治疗后肿瘤微环境表征的重要指标，也是设计更有效的免疫治疗药物，进行精准治疗的重要信息源。

　　TMA：Tissue Microarray

　　*部分摘录