原代细胞分离和培养基本步骤

 1、器官和组织的选择

    尽可能的去除不必要的组织和血迹。

    2、原代细胞的分离

    （1）应用PriCells原代细胞分离试剂盒I、II、III。

    （2）根据组织来源不同，可选用不同的PriCells原代细胞分离试剂盒。

    3、原代细胞的培养：

    （1）PriCells原代细胞特制培养基

    （2）PriCells原代细胞特制添加物

    （3）优质胎牛血清

    4、细胞的培养和鉴定：

    PriCells原代细胞鉴定试剂盒

    4、原代细胞的传代、保存

    （1）传代：依椐细胞的生长状态，生长的细胞1：2或1：3进行传代。

    （2）保存：DMSO＋培养液＋血清

    按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟）→冰箱冷冻室（30分钟）→超低温冰箱（－80℃  过夜）→液氮。

    5、原代细胞的复苏

    （1）取出细胞，迅速放入37℃温水中快速解冻。

    （2）吸出细胞悬液，并加10倍以上培养液。

    （3）用培养液适当稀释后接种培养瓶，放入37℃ CO2培养箱静置培养。