原代细胞培养之取材

　　取材作为原代细胞培养过程中的第一部至关重要，以下几种取材技术，你都用过哪些方法呢？

　　各类组织取材，操作及注意事项：

　　1.皮肤和粘膜

　　主要取皮片，面积一般2~4平方厘米。

　　2.内脏和实体瘤

　　1）无菌环境；

　　2）熟悉所需组织的类型和部位；

　　3）要避开破溃、坏死液化部分，以防污染，尽量去除混杂的结缔组织。

　　3.血液细胞

　　一般多抽取静脉外周血，或从淋巴组织中(如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离细胞，取材时应注意抗凝。

　　4.骨髓、羊水、胸/腹水细胞

　　严格无菌，注意抗凝，还要尽快分离培养，离心后，用无钙、镁PBS洗两次，再用培养液洗一次后即可培养，不宜低温存放。

　　5.动物组织取材——鼠胚组织

　　1）用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物；

　　2）将其浸泡在含有75%酒精的烧杯中，5分钟后取出动物；

　　3）在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢，切开皮肤；

　　4）用无菌操作法解剖取胚。

　　6.动物组织取材——幼鼠胚肾(或肺)

　　幼鼠采用上述方法处死消毒后→腹部朝上固定在木板上，先切开游离毛皮并拉开至两侧→采用无菌法打开胸腔取肺，或从背部打开腹腔取肾。

　　7.鸡(鸭)鸟类胚胎组织

　　1）取孵化至适当胚龄(9~12天)的胚蛋，用照蛋灯在暗处灯检，若有丰富血管、胚体有运动的胚蛋，说明胚体发育良好，并用有色笔划出气室和胚体位置；

　　2）将胚蛋置于蛋架上，先用温水清洗蛋壳，再用75%酒精棉球擦干；

　　经碘酒、75%酒精消毒后，在无菌条件下采用无菌法用剪刀或镊子打开气室，沿气室边缘去除蛋壳；

　　3）用眼科镊撕去壳膜，暴露出鸡胚；

　　4）用弯头镊轻挑起胚头，取出胚胎，放入无菌平皿中，解剖取材。