原代细胞因它可以模仿人体的新陈代谢逐日成为科研学者青睐的研究工具,但是原代细胞曾是出了名的难培养,需要耗费大量的时间、成本和资源。即使细胞捱过了极其严苛的解离步骤,但污染仍然是一个隐患,有可能让几天的成果化为乌有。此外还存在其他细胞污染、生长缓慢以及数量有限的问题。
细胞系因容易培养且产量可观而成为研究首选。然而,它们并不完美。细胞系会不断突变。连续传代导致它们的基因型和表型发生变化。有时候,它们已经变得面目全非。一个研究小组曾经发现,HEK293细胞系的腺病毒转化产生的细胞更接近未成熟神经元,而不是人胚肾细胞。
于是hTERT、PSC和iPSC来源的永生化细胞应运而生,他们 并不是真正的原代细胞,但是他们却能表达出大部分原代细胞应有的特性例如:强制表达hTERT让原代细胞能维持足够的端粒长度,避免增殖性衰老。hTERT诱导的原代细胞不但具有连续传代的能力,而且没有染色体不稳定性。这种细胞可以扩增,也可以冷冻、保存和解冻,以适应实验的时间安排,但是它只是延缓了细胞的衰老,增加了传代的次数,并不是表示细胞可以像hela一样“长生不老”。
PSC和IPSC也是一样的,PSC的真正价值在于能够从一种细胞分化成多种细胞类型。iPSC让研究人员能够采集轻松获取的细胞,并将它们转变为不易获取的细胞,但是预实验和验证实验结果一般建议使用原代细胞,因为没有经任何修饰的细胞才能得到实验最为精确的数据。
一、原代细胞计数 将血球计数板及盖片用擦试干净,并将盖片盖在计数板上。 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。 静置3分钟。 镜下观察......
近日,中国农业科学院饲料研究所科研人员研究创新了一种简单、快速的鸭胚肝脏原代细胞分离和培养方法,并研究了鸭胚肝脏原代细胞胆碱缺乏模型中的基因可变剪切,为鸭胆碱与基因结构的相关性研究提出了新的见解。相关......
一、贴壁细胞的消化法传代1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶,使瓶底细胞都浸入溶液中。3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察,发......
取人或动物体内(或胚胎)的组织,将其剪碎至1mm3的组织块,再采用的如下方法进行分离培养:一、悬浮细胞的分离方法1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中,1000rpm/分钟离心5分钟。2、......