发布时间:2020-07-13 16:38 原文链接: 原代细胞骨架的染色方法

微丝的显示方法步骤:

1.    用PBS液漂洗盖片培养的原代细胞3次,每次30s;

2.    用2%的甲醛/PBS液固定原代细胞3min;

3.    用0.5%的三硝基甲苯/PBS处理3次,每次10min;

4.    PBS漂洗3次;

5.    用罗丹明(rhodamine)标记的鬼笔环肽(phalloidin)(1:10)室温中反应15min;

6.    PBS漂洗3次;

7.    60%甘油+荧光防淬剂封片;

8.    荧光显微镜观察;

 

微管的显示方法:

1.    用PBS液漂洗盖玻片的原代细胞3次,每次30s;

2.    在室温中用3%甲醛/PBS固定20min;

3.    用PBS液再漂洗3次,每次1min,最后用滤纸吸干多余的PBS液;

4.    投入冷丙酮中(-10—-20℃)7min;

5.    用PBS漂洗3次,每次1min,最后用滤纸吸干多余的PBS液;

6.    向直径6cm的干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的一级抗微管蛋白抗体,令小盖片细胞面向下扣在抗体液上,覆以皿盖,于37℃温箱中放置45min—1h;

7.    向碟皿内匀速缓慢滴加PBS,令盖片浮起在液面,用镊子夹出,按步骤3处理;

8.    向干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的荧光标记的二抗,其后操作按步骤6进行;

9.    按步骤7和3操作;

10.滴pH8.5的90%的甘油/PBS少许于载玻片上,把小盖片的原代细胞面覆在大盖片上;

11.将盖片置于荧光显微镜下观察;


相关文章

原代细胞计数的操作步骤

一、原代细胞计数 将血球计数板及盖片用擦试干净,并将盖片盖在计数板上。 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。 静置3分钟。 镜下观察......

新方法实现鸭胚肝脏原代细胞快速分离和培养

近日,中国农业科学院饲料研究所科研人员研究创新了一种简单、快速的鸭胚肝脏原代细胞分离和培养方法,并研究了鸭胚肝脏原代细胞胆碱缺乏模型中的基因可变剪切,为鸭胆碱与基因结构的相关性研究提出了新的见解。相关......

古脊椎所等揭开巨犀体型演化谜团

巨犀是犀超科中的独特支系,约4000~2200万年前生活在欧亚大陆,主要在中国、巴基斯坦、哈萨克斯坦和蒙古,也零星发现于东欧等地区。巨犀是史上体型最大的陆生哺乳动物,在演化过程中体型增长极快,其体型和......

科学家研发新型金属有机骨架非抗生素型抗菌剂

细菌耐药性的存在使得细菌感染成为临床治疗的严重障碍,特别是对于革兰氏阳性细菌,例如:耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌,其会大大降低对碳青霉烯和万古霉素的敏感性。而革兰氏阴性杆菌则很容易演变成耐药性菌株,难以......

科学家称被炒“外星人”骨架实为人类胎儿

Ata患有多种骨骼疾病。这引发了其是外星人的胡乱猜测。图片来源:EMERYSMITH研究人员对一副15厘米高的奇特的人体骨架进行了测序,并且确认了可能导致其古怪外表的突变。这终结了一个由来已久且曾在不......

科学家称被炒“外星人”骨架实为人类胎儿

Ata患有多种骨骼疾病。这引发了其是外星人的胡乱猜测。图片来源:EMERYSMITH研究人员对一副15厘米高的奇特的人体骨架进行了测序,并且确认了可能导致其古怪外表的突变。这终结了一个由来已久且曾在不......

具备完整血管的工程化肺脏即将成为现实

最近,来自哥伦比亚大学的研究者们成功地开发出了首个具备完整血管系统的工程化肺脏,这一技术或许能够很大程度上改变目前肺脏疾病的治疗方法。目前大部分的工程化肺脏都是利用支架进行肺细胞的三维构建。而这一新型......

“骨架”记忆帮水螅再生

很少有动物的恢复力能赶得上水螅。这种体型较小并长有触角的淡水动物能在变成碎片后,再生成一个健康的动物。近日刊登于《细胞—通讯》的研究显示,水螅碎片有结构记忆,从而有助于它们根据“骨架”形成新身体。之前......

CellRep:细胞骨架缺失或引发诸如癌症等多种疾病

动物细胞一般包含有三种类型的细胞骨架分子,即肌动蛋白丝、中间丝和微管。细胞骨架具有流动性的结构,其在细胞中往往可以经历快速重组,从而进行多种细胞过程,比如细胞形态发生、运动、胞内运输以及细胞分裂等;然......

特殊蛋白控制细胞微管组织对细胞结构起重要作用

在研究细胞结构时,可以根据形状来推测其功能。植物细胞中有一个动态的骨架,负责引导细胞的生长、发育、运动和分裂。随着时间推移,骨架的变化造就了细胞的形状和行为,最终形成整个生物体的结构和功能。据物理学家......