原子吸收分光光度计的波长校准方法主要有以下几种:
利用已知波长的标准光源:
汞灯或氖灯校准:这是比较常用的方法。汞灯和氖灯能发出一系列特征波长的光,且这些波长是已知且精确的。比如汞灯有 253.7nm、365.0nm、435.8nm、546.1nm、640.2nm、724.5nm 和 811.6nm 等特征谱线,氖灯也有相应的特征谱线。在进行校准时,点亮汞灯或氖灯,让其光线通过原子吸收分光光度计的光路,然后将仪器设定到相应的波长范围进行测量。如果仪器显示的波长值与汞灯或氖灯的已知特征波长值存在偏差,就需要根据偏差的大小和方向进行校准。例如,若仪器显示的 253.7nm 波长处的读数与实际偏差较大,可通过仪器的波长调节装置(如波长鼓轮或数码轮等)进行调整,使读数尽可能接近 253.7nm,从而实现波长校准。这种方法的优点是汞灯和氖灯的特征波长准确可靠,校准精度较高;缺点是需要有稳定的电源来驱动灯源,且灯源有一定的使用寿命,需要定期更换 158。
其他元素灯校准:如果没有汞灯,也可以用砷灯(193.7nm)、锌灯(213.9nm)、镁灯(285.2nm)、铜灯(324.8nm)、钙灯(422.7nm)、钾灯(766.5nm)和铯灯(852.1nm)等其他元素灯来校验波长示值误差和重复性。其原理与使用汞灯或氖灯类似,都是利用元素灯发出的已知特征波长的光来与仪器的波长读数进行对比和校准 1。
使用标准物质:
氧化钬玻璃滤光片:氧化钬玻璃滤光片在特定波长处有特征吸收峰,例如在 361nm 处。进行波长校准时,先将原子吸收分光光度计开机并预热一段时间,然后将测试方式设置为透射比(% T)状态,把波长设置在特征吸收峰附近(如 355nm 处),接着打开样品室盖,将氧化钬玻璃滤光片插入样品槽中,盖好样品室盖,将参比物(通常以空气作为参比)推入光路中。按相关按键调 100% T,再将氧化钬玻璃滤光片推入光路中,观察并记录此时滤光片的透射比值。一般情况下,在标准物质吸收峰约 ±5nm 附近由短波向长波方向每隔 1nm 逐点测试,直至找到最小读数对应的波长位置。如果该波长位置与氧化钬玻璃滤光片的特征吸收峰波长值不一致且超出仪器技术指标规定的误差范围(通常为 ±2nm),则需要打开仪器外壳,松开波长刻度盘上的固定螺钉,转动刻度盘,使刻度指示与特征吸收峰的波长值之间的误差在允许范围内,旋紧固定螺钉,装上外壳,再重复上述步骤,实测仪器波长精度在允许范围内即可。这种方法的优点是利用了标准物质的特征吸收,校准结果较为准确;缺点是操作相对复杂,且需要使用特定的标准物质(氧化钬玻璃滤光片)4。
利用仪器自带的校准功能(如果有):部分先进的原子吸收分光光度计可能自带波长校准功能或软件校准程序。这些功能通常是基于仪器内部的一些标准参数或算法来实现波长的校准。例如,有些仪器可以通过内置的标准波长参考点进行自动校准,或者在仪器的操作软件中有专门的校准模块,用户只需按照软件提示的步骤进行操作即可完成波长校准。这种方法的优点是操作简便,自动化程度高,减少了人为操作误差;缺点是依赖于仪器本身的准确性和稳定性,如果仪器的内置标准参数出现偏差或软件算法存在问题,可能会影响校准效果。
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