在反相键合相色谱仪中， C18是常用的键合固定相，水是常用的流动相弱组分，重要的是选择流动相的强组分，常用的强组分有甲醇、乙腈和四氢呋喃。反相键合相色谱仪流动相的选择规则如下：
一、若样品中含有两个以下氢键作用基团（如－COOH、－NH2和－OH等）的芳香烃邻、对位或邻、间位异构体，可选用甲醇－水为流动相。
二、若样品中含有两个以上Cl、I、Br邻、间、对位异构体或极性取代基的间、对位异构体以及双键位置不同的异构体，可选用乙腈－水为流动相。
三、当样品的 k′＞30（一般要求1＜k′＜20）时，应在甲醇－水流动相中加入适量四氢呋喃、氯仿或丙酮，使样品的k′值保持在适当范围内，也可以通过减少固定相表面键合碳链浓度或缩短碳链长度来减小k′值。
四、若样品中含有－NH2这类基团时，应在流动相中加入适量有机胺添加剂，以提高样品保留值的重现性和色谱峰的对称性。