变性高效液相色谱分析巯嘌呤甲基转移酶基因多态性位点

摘要:目的　应用变性高效液相色谱技术(DHPLC) 分析巯嘌呤甲基转移酶(TPMT) 基因多态性位点。方法　用以PCR 为基础的DHPLC ,检测健康成人和脐血以及急性白血病病人,TPMT基因第5 外显子G238C、第7 外显子G460A 和第10 外显子A719G的3 个多态性位点。结果　健康成人、脐血和急性白血病病人全部DNA 样本,TPMT基因外显子区的3 个位点的多态性频率为3149 % ,远低于白种人和非洲人。变异的位点仅为第10 外显子A719G,且均为杂合变异。TPMT第5 外显子630 例标本的色谱峰均为单峰。第7 外显子有316 例为单峰,214(34 %) 为杂合峰。将单峰标本进行1∶1 混合后重新进样也有杂合峰出现。经DNA 测序分析,证实此区无序列变异;杂合峰标本在54 和60 ℃为单峰,55～59 ℃均为杂合峰。而单峰标本峰形未随温度发生变化。说明DHPLC的检测误差并不是柱箱温度不合适引起的。第10 外显子有608 例为单峰,杂合峰为22 例,其中10/ 22 例标本进行DNA 直接测序,证实为杂合变异。结论　DHPLC技术能快速筛选出TPMT第5 和第10 外显子区的多态性位点,但不能检测出第7 外显子的多态性位点。因此,DHPLC不能作为单一方法进行TPMT基因多态性位点的检测。