噬菌体效价的测定

实验方法原理

噬菌体的效价就是 1 ml 培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，噬菌体产生肉眼可见的噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数，但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近 100％（—般偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感染），所以为了准确地表达病毒悬液的浓度（效价或滴度）一般不用病毒粒子的绝对数置而是用噬菌斑形成单位（plague-forming units， 简写成 pfu）表

实验材料 大肠杆菌

试剂、试剂盒 肉膏蛋白胨琼脂平板液体培养基的小试管含琼脂培养基的试管

仪器、耗材 灭菌小试管灭菌吸管48℃ 水浴箱

实验步骤

1. 稀释噬菌体

1.1 将 4 管含 0.9 ml 液体培养基的试管分别标写 10-3，10-4，10-5，和 10-6。

1.2 用 1 ml 无菌吸管吸 0.1 ml 10-2 大肠杆菌噬菌体，注入 10-3 的试管中，旋摇试管，混匀。

1.3 用另一支无菌吸管从 10-3 管中吸 0.1 ml 加入 10-4 管中，混匀，余类推，稀释至 10-6 管。

2. 噬菌体与菌液混合

2.1 将 5 支灭菌空试管分别标写 10-4，10-5，10-6，10-7 和对照。

2.2 用吸管从 10-3 噬菌体稀释管吸 0.1 ml 加入 10-4 的空试管内，用另一支吸管从 10-4 稀释管内吸 0.1 ml 加入 10-5 空试管内，直至 10-7 管。

2.3 将大肠杆菌培养液摇匀，用吸管取菌液 0.9 ml 加入对照试管内，再吸 0.9 ml 加入 10-7 试管，如此从最后一管加起，直至 10-4 管，各管均加 0.9 ml 大肠杆菌培养液。

2.4 将以上试管旋摇混匀。

3. 混合液加入上层培养基内

3.1 将 5 管上层培养基溶化，标写 10-4，10-5，10-6，10-7 和对照。使冷却至 48℃，并放入 48℃ 水浴箱内。

3.2 分别将 4 管混合液和对照管对号加入上层培养基试管内。每一管加入混合液后，立即旋摇混匀。

4. 接种了的上层培养基倒入底层平板上

4.1 将旋摇均匀的上层培养基迅速对号倒入底层平板上，放在台面上摇匀，使上层培养基铺满平板。

4.2 凝固后，置 37℃ 培养。

5. 观察平板中的噬菌斑，将每一稀释度的噬菌斑形成单位记录于实验报告表格内，并选取 30～300 个 pfu 数的平板计算每毫升未稀释的原液的噬菌体数（效价）。

噬菌体效价＝pfu 数×稀释倍数×10