噬菌体文库的扩增实验

噬菌体

MgSO4 麦芽糖 琼脂糖 氯仿 DMSO SM

离心机 分光光度计 水浴锅

1.  制备铺平板菌

（1）2.5 ml 新鲜过夜培养的宿主菌液接种于250 ml 含0.2%麦芽糖和10 mmol/l MgSO₄的LB培养液中。

（2）在37℃恒温摇床剧烈摇荡2~4 h，培养液中菌悬液浓度OD₆₀₀达到0.5左右。

2.  将装有文库的微量离心管在离心机上稍加离心，以便与氯仿分开。

3.  将已包装和滴定的噬菌体水相（不含氯仿）加于铺平板菌中，37℃温育15 min。

4.  加0.5  ml 噬菌体/宿主菌混合液到8 ml 47℃保温的顶层琼脂糖中，混匀后迅速倒在新鲜的37℃保温的150 mm 的H平极上。

5.  轻轻转动平板待顶层琼脂糖铺匀后再放置5 min 使其凝固，倒扣平板于37℃培养6~7 h 。

6.  从恒温培养箱中取出所有转染的平板，分别在每一个平板中加入10 ml SM悬浮培养基，于4℃放置2~16 h。

7.  洗脱噬菌体，然后从所有平板中收集SM并合并到一个玻璃瓶或聚丙烯塑料管中。

8.  以2 800 g 离心5 min，将上清转移到新的带Teflon盖的玻璃试管中，再加入0.5 ml 氯仿，混匀，滴定已扩增的文库。

用于扩增λ载体文库的对应大肠杆菌宿主菌株