圈卷产色链霉菌硝基烷类氧化酶的分离纯化及酶学性质

摘　要:圈卷产色链霉菌硝基烷类氧化酶基因naoA 在大肠杆菌中获得了成功表达,从含有重组质粒pNA101(pET23b ∷naoA) 的工程菌株BL21 (DE3) 中分离纯化了硝基烷类氧化酶,SDS2PAGE 检测为均一。对纯酶进行了酶学性质及动力学研究。底物为12硝基丙烷、22硝基丙烷和硝基乙烷时,在014molPL 的磷酸缓冲液中,酶的最适反应pH 值为7～8 ,最适反应温度为48 ℃～56 ℃。室温保存6d 后,酶的活性保持了4313 % ,但对60 ℃以上的高温敏感。硫醇化合物如巯基乙醇、还原型谷胱甘肽不同程度地抑制酶活性,特别是NADH ,其浓度为1mmolPL 时,酶活性几乎全部丧失。以12硝基丙烷为底物时, NaoA 的Km 为3517mmolPL , Vmax 为01199μmolP(μg. min) 。