培养基的使用注意事项

培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。

培养基种类很多，根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基；根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基；根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等；根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节 pH，还须进行灭菌，通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质，易被污染或变质。配好后不宜久置，现配现用。

培养基制备过程

1. 配料

配方换算→在容器中加入少量水（蒸馏水，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。

2.溶解

淀粉溶解：少量冷水调成糊状。加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃ ，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。

3.调 PH

用 1N 的盐酸或 1N 的 NaOH 把培养基调节到所要求的值。

4.过滤

滤纸或棉花进行过滤。（有时可以省去） [4]

5.分装

一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。

(1)三角瓶

若作静置培养，则 100ml 培养基/250ml 的三角瓶，zui多不能超过 150ml 培养基/250ml 的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则 15-20ml 培养基/250ml 的三角瓶，保证通气良好。

(2)试管分装

液体培养基一般装 4-5ml，约试管的 1/4 高度；

固体斜面培养基一般装 3-4ml，约试管的 1/5 高度。

6.包扎

分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

7.灭菌

按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。

8.摆斜面

灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的 1/2。

9.贮存

培养基在 30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于 2-8℃冰箱中备用

培养基配制好后为什么必须立即灭菌？

大家都知道，培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异。为了达到实验和研究的目的，要按照培养基的配方进行配制。而任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯 培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。发酵过程中，培养基灭菌主要有以下几个原因：如不灭菌，会使生物反应的基质或产物，因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降;杂菌也会产生代谢产物，这 就使产物的提取更加困难，造成得率降低，产品质量下降;杂菌大量繁殖后，会改变反应液的 pH 值，使反应异常;有些杂菌会分解产物，使生产失败;如果发生噬 菌体污染，生产菌细胞将被裂解，使生产失败。培养基灭菌是杀灭培养基中本身的原著菌或在空气中附着的杂菌,更好的让目标菌生长(减少杂菌消耗培养基中的营养，而且有些杂菌会抑制你目标菌的生长)。一般人工培养菌基本上是尽可能让其生长快速或者产生代谢产物,因此就让其在培养基上生长,以减少培养时间与提高经济效益。