培养基

　　培养基是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。适宜的培养基不仅可用于细菌的分离纯化培养、传代、菌种保存，还可用于研究细菌的生理、生化特性，是病原菌分离鉴定的重要环节和必不可少的手段。

　　一、培养基的组成成分

　　（一）营养物质

　　细菌需要的基础营养物质应含有氮源、碳源、无机盐类和生长因子等，常用的营养物质如下：

　　 1.蛋白胨

　　蛋白胨是制备培养基时最常用的成分之一，提供细菌生长繁殖所需要的氮源。

　　 2.肉浸液

　　是用新鲜牛肉浸泡、煮沸而制成的肉汁。其中含有可溶性含氮浸出物（肌酸、黄嘌呤、腺嘌呤、谷氨酸、甘氨酸等）和非含氮浸出物（肝糖、乳酸、琥珀酸、磷酸己糖、脂肪、无机盐等）。还有一些生长因子。肉浸液可为细菌提供氮源和碳源，但肉浸液中所含氮物质过少而不能满足细菌的需要，因此在制备培养基时应再加入1%～2%的蛋白胨和0.5%NaCl。

　　 3.糖类、醇类

　　为细菌生长提供碳源和能源。制备培养基所用的糖类、醇类有多种，常用的糖类有单糖（葡萄糖、阿拉伯糖等）、双糖（乳糖、蔗糖等）和多糖（淀粉、菊糖等）；常用的醇类有甘露醇、卫茅醇等。除葡萄糖、蔗糖主要作为碳源和能源的基本成分外，其他糖类和醇类主要用于鉴定细菌所做的发酵反应。

　　 4.无机盐类

　　提供细菌生长的各种元素，如：钾、钠、铁、镁、钙、磷、硫等。用于制备培养基的无机盐类有多种，其中最常用的有氯化钠和磷酸盐，前者对维持酶的活性、调节菌体内外的渗透压非常重要，后者是细菌良好的磷源，并在培养基中具有缓冲作用。

　　 5.生长因子

　　是细菌生长所必需的，但需要量很小。在制备培养基时，常加入维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等生长因子。

　　血液中可提供辅酶（如V因子）、血红素（X因子）等特殊生长因子，所以，在培养基中加入血液可用于培养营养要求较高的细菌。

　　（二）凝固物质

　　最常用的凝固物质为琼脂，特殊情况下也可用明胶、卵白蛋白、血清等。

　　琼脂是从石花菜中提取出来的一种多糖，在45℃以下则凝固成凝胶状态，是一种理想的固体培养基赋形剂。因其不被细菌分解利用，故无营养作用。

　　（三）抑制剂和指示剂

　　 1.抑制剂

　　 抑制剂必须具有选择抑制作用，在制备培养基时加入一定种类的抑制剂，目的在于抑制非检出菌（非目的菌）的生长，以利于检出菌（目的菌）的生长。抑制剂的种类很多，可根据不同的目的选用不同的抑制剂。

　　 2.指示剂

　　 在培养基中加入一定种类的指示剂，是为了便于观察细菌是否利用和分解培养基中的糖、醇类。常用的有酚红、中性红、甲基红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中国蓝等酸碱指示剂。亚甲蓝常用作氧化还原指示剂。

　　 二、培养基种类

　　 1.基础培养基

　　 含有基础生长所需的基本营养成分，最常用的是肉浸液，俗称肉汤，主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。基础培养基广泛用于细菌的增菌、培养，也是制备其他培养基的基础成分。

　　 2.营养培养基

　　 在基础培养基中可加入葡萄糖、血液、生长因子等特殊成分，供营养要求较高的细菌的细菌生长。

　　 3.鉴别培养基

　　 利用细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示剂，观察细菌生长过程中分解底物所释放的不同产物，通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。例如糖发酵管、克氏双糖铁琼脂（KIA）、伊红-亚甲蓝琼脂和动力-吲哚-尿素（MIU）培养基等。

　　 4.选择培养基

　　 在培养基中加入抑制剂，去抑制标本中的杂菌生长，有助于目的菌的生长。例如培养肠道致病菌的SS琼脂，其中的胆盐能抑制革兰阳性菌，枸橼酸钠和煌绿能抑制大肠埃希菌，因而使致病的沙门菌、志贺菌容易分离到。

　　 5.特殊培养基

　　 包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。前者是培养专性厌氧菌的培养基，除含营养成分外，还加入还原剂以降低培养基的氧化还原电势，如疱肉培养基、巯基乙醇酸钠培养基等。后者是针对细胞壁缺损的细菌L型，由于胞内渗透压较高，故培养该菌时必须采用高渗（3%～5%NaCl、10%～20%蔗糖等）低琼脂培养基。

　　三、分离培养基

　　 1.血平板：适于各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分离，都应接种此平板。

　　 2.巧克力血平板：其中含有V和X因子，适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的标本。血液中有V，X因子是位于红细胞中的，一般细菌不能利用，轻微的加热使红细胞破坏释放到细胞外方可利用。

　　 3.中国蓝或伊红亚甲蓝平板：可抑制革兰阳性细菌，有选择地促进革兰阴性细菌生长，因分解乳糖能力不同，在此平板上菌落颜色不同。

　　 4.麦康凯平板：具中等强度选择性，有少数革兰阴性菌不生长。在麦康凯平板上能否生长，是非发酵菌鉴定的一个依据。

　　 5.ss琼脂：有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。

　　6.碱性琼脂或TCBS琼脂：用于从粪便中分离霍乱弧菌及其他弧菌。

　　 7.血液增菌培养基：用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。

　　 8.营养肉汤：用于一般细菌的增菌培养。