培育细胞遗传学的检测技能

   细胞培育是体外研讨细胞生物学性状、遗传学及分子生物学特性zui直接有效的手法。培育细胞遗传学的主要检测技能，包含性染色体的检测、染色体闪现、染色体显带及染色体基因定位等。对培育细胞的分子生物学检测主要包含细胞DNA检测、RNA检测及蛋白质的检测，而相关的生物学检测主要包含细胞酶学检测及细胞凋亡的检测。
   
    组织培育细胞是研讨细胞遗传zui便利、zui有效的办法和对象；也是揭示培育细胞性状的重要方面。人二倍体细胞具有46条染色体数就是用细胞培育法所确认出来的。当前已发展出染色体分带、姊妹染色单体分解染色、染色体原位杂交等多种技能。近年染色体荧光基因标记法又取得迅速发展，使基因作为实体得以在染色体上闪现，从而填补了染色体和分子遗传学之间的空白。染色体的研讨已成为组织培育技能中重要组成部分。

    一、性染色体检测

    (一)原理
   
    在间期细胞核中，女人x染色质和男性Y染色质均可用特殊染色法闪现出来。女人的两个x染色体中的一个，在间期时的染色质呈异固缩(heteropycnosis)，呈深染的小体称Barr氏体(图9—1)。Barr氏体坐落问期细胞核内面，呈三角形或半月形小体，易为碳酸复荭等染料着色。正常女人Barr氏体阳性，男性为阴性。男性Y染色质坐落间期细胞核近中心部，易为盐酸阿的平着色，荧光显微镜下调查发较强荧光，呈点状小体，发光部分系Y姿色体异固缩的长臂。初代培育细胞和二倍体细胞株均可调查到性染色质，传代细胞系表现不规律。

    (二)办法

    1.碳酸复红(basic fuchsin)闪现x染色质法

    (1)资料：盖玻片培育的细胞。

    (2)染色液

    储存液：称碱性复红3g，溶于1OOml 70％乙醇中，可长时间保存。

    (3)染色过程

    1)细胞：盖玻片培育细胞用37℃的BSS漂洗后，立即投入染色液内染色5～lOmin(亦可先固定再染色)；如用涂片标本则应待涂片干后，迅速投入96％酒精固定10～15min后再染色。

    2)分解：用96％酒精分解lmin，分解时要不断摇摆，把片子上多余的染料漂洗掉。

    3)脱水：通过纯酒精lmin。

    4)封片：二甲苯透明2~3min，树胶封固。

    (4)成果：细胞质不着色，细胞核染成紫红色；阳性Barr氏体附于细胞核膜内面呈三角或半月形小体。
 
    2．荧光染色显不Y染色质法

    (1)资料：盖玻片培育的细胞。

    (2)染色液

    (3)染色过程：Y染色质闪现染色与染色体荧光显带法相同。