如何正确利用MPN法计算菌落？

　　1915年，McCrady首次发表了用MPN(最可能数MostProbale Number,MPN)来估算细菌浓度，这是一种应用概率理论来估算细菌浓度的方法。目前，中国普遍将MPN法用于食品大肠菌群等的检测。由于对MPN计数法的理解不充分，导致很多检测人员在使用MPN法进行微生物定量检测的时候存在很多错误认识，从而导致检测结果的错误。正确理解MPN计数法对实验室的微生物检测及食品工业的微生物控制都有着重要的指导作用。以下对使用MPN计数法时容易出现的问题给予说明。

　　一、使用MPN计数法做检测时，操作中应确保以下三个方面：

　　1)样品均质和稀释均匀。

　　MPN计数法基于两点假设：1、微生物在完全混匀的稀释液里随机分布；2、只要接种的稀释液里含有微生物就一定在液体培养基里生长。若样品及稀释液混匀不充分，就满足不了MPN计数法统计的基础，从而不能获得准确的结果。因此，在检测过程中，必须按要求对样品进行均质、对稀释液充分混匀。

　　2)各稀释液完全接种通常使用三个稀释度进行MPN法的检测。

　　然而，很多检测人员往往会根据样品估计其结果，当认为细菌数量比较低，阳性管数少时，为图省事仅接种前两个稀释度，这种做法是错误的。三个稀释度中，不管前两个稀释度的结果如何，下一个稀释度的结果都是无法预测的。仅有前两个稀释度的结果无法满足三稀释度MPN计算公式的要求，因此就无法获得MPN结果的。在实际工作中，即便预先估计样品中细菌浓度很低，所有稀释度都必须全部接种。

　　3)接种体积准确MPN表和MPN计算公式都是和接种体积密切相关，接种体积直接影响MPN结果，因此接种体积必须准确，这是MPN计数法成功的关键。

　　另一方面，培养基的体积并不作为参数出现在MPN计算公式中，只要接种后培养基的浓度接近正常的浓度(单倍浓度)，满足目标微生物的生长需求即可，培养基的量允许存一定的误差。

　　二、应按要求进行确证实验 有的MPN法需要完成可疑菌落的确证。只有最终确定为阳性的管才能计数为阳性管，如果没有完成确证步骤，把中间步骤的阳性管数记做阳性，就会获得偏高的检测结果。

　　三、正确使用MPN表MPN表应根据接种稀释液中所含样本的量查询，而不是直接根据接种稀释液的量查询。如第一稀释度接种10倍稀释液10ml，则第一稀释度接种样本量为10g(ml)/10=1g(ml)，应根据1g(ml)查表或计算而不是根据10g(ml)。对比GB4789.3-2010与GB/T4789.3-2003的MPN表会发现，GB/T4789.3-2003中有64种组合，而GB4789.3-2010中仅有40种，这是因为新版的MPN表删除了24种包括“0-0-3”这类失去意义的组合。在使用GB 4789.3-2010时，若出现无法查表的情况，应对该结果持高度怀疑，并弃用该结果。

　　四、检测结果的正确理解 虽然实验结果以MPN值表示，但MPN值并不能表示实际微生物数量，这是MPN计数法的局限性所在。实际微生物数量有95%的可能性是这个置信区间中的一个值，MPN值是置信区间中可能性最大的一个。如应用GB4789.3-2010检测某产品，接种量0.10g,0.01g,0.001g对应的阳性管数为1-1-0，查表MPN值为“7.4/g”，其95%可信限上限为“1.3/g”、下限为“20/g”。对这样的结果解释为：该产品中真实大肠菌群有95%的可能是在1.3/g～20/g之间，最大可能是7.4/g。若该产品的安全标准为<90MPN/g，按该标准判为合格，此项目的安全风险可忽略不计；若该产品的安全标准为<10MPN/g时，虽同理判为合格，但该产品中真实大肠菌群>10/g的可能性不能忽略，这就存在一定的风险。

　　五、对标准的正确选择在使用MPN计数法检测食品中大肠菌群时，部分检测人员不能正确选择检测标准，从而导致无法根据检测结果做评判。根据《中华人民共和国卫生部2009年第16号公告》中规定：现行食品标准中规定的大肠菌群指标以“MPN/100克或MPN/100毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》(GB/T4789.3-2003)进行检测；以“MPN/克或MPN/毫升”、“CFU/克或CFU/毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》(GB/T 4789.3-2008)进行检测。而《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》(GB/T 4789.3-2008)已被《食品安全国家标准食品微生物检验大肠菌群计数》(GB4789.3-2010)取代，在检测工作中应根据上述规定选择正确的检测标准。

　　参考文献：贾俊涛,梁成珠,马维兴.食品微生物检测工作指南[M].