姊妹染色单体互换标本制备与分析实验

人外周血

BrdU溶液 SSC Giemsa染液 PBS

紫外灯 恒温水浴箱 培养皿 擦镜纸

1.  培养液的制备、采血、培养等操作同常规染色体的制备。（见常规染色体标本制备方法）

2.  在外周血培养24小时加入BrdU溶液0.2毫升，使终浓度为每毫升培养液含8微克。加入BrdU后，用黑纸包褒培养瓶，置37℃温箱中继续培养48小时。

3.  秋水仙素处理方法同前（见染色体标本的制备）。

4.  按常规方法收集细胞、固定、低渗、制片，并将标本片置37℃温箱中烘片24小时。

5.  将标本面朝上平放于染色槽中，然后加入2xSSC溶液，以溶液不超过标本表面为度。然后在标本上复盖一张比标本稍大的擦镜纸，使纸边垂到2xSSC溶液中，用以保持标本湿润。

6.  将染色槽置55℃恒温水浴箱中温育，上用30 W 紫外灯垂直照标本30分钟，灯距标本距离约为10 cm。照射后轻轻取掉擦镜纸，立即用蒸馏水冲洗标本。（水温为40℃左右）。

7.  用Giemsa染液（原液用pH6.8磷酸缓冲液1：10配制），染色5~10分钟左右，用自来水冲洗，空气干燥后镜检。

8.  姊妹染色单体互换的镜检分析及频率计算

（1）在正常或异常情况下，姊妹染色单体互换的频率不同。根据上述标本染色单体的明显色差不同，通过计数可较准确检测姊妹染色单体之间的互换频率。

（2）选取染色体分散良好，两条姊妹染色单体染成一深一浅的中期相，凡发生有姊妹染色单体互换的染色体，可见在深染的染色单体上出现浅染的片段。对在染色体端部出现的互换计为一次（一个SCE）；对在染色单体中间出现的互换计为两次（2个SCE）；对在着丝粒部位的，经判明不是两条染色单体发生扭转者，计为一次（1个SCE）。

（3）计数30个中期分裂相的SCE后，计算SCE的频率。

①SCE频率=n个中期相SCE之和/n个细胞

②中国人正常SCE频率为5.7 ± 0.4