实时PCR

试剂、试剂盒 cDNA 样品rRNA 引物和探针目的基因的引物和探针Tag Man Universal PCR Master Mix 超纯水

仪器、耗材 序列监测仪

实验步骤

一、材料

1. 缓冲液、溶液和试剂

来自方案 5 的 cDNA 样品

20X18SrRNA 引物和探针（AppliedBiosystems)

20X 目的基因的引物和探针（AppliedBiosystems)

2XTagManUniversalPCRMasterMix(4304437,AppliedBiosystems,FosterCity,CA)

DEPC 处理的超纯水 (BiotecxLaboratories)(储存于 4°C)

试剂储存于-20°C

2. 特殊货备

AppliedBiosystems7700 序列监测仪（PEAppliedBiosystems，FosterCity，CA)

二、方法

1. 稀释来自方案 5 的 cDNA，1:100

2. 用 1ul 稀释溶液做对照反应，10ul 做目的反应

3.PCR 循环条件

(1)50°C，2 min。

(2)95°C，10 min。

(3)PCR 循环--n 个循环。

a.95°C,15s。

b.60°C,1min。