一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺(Spermidine):溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺(ammoniumacetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性, 须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾(potassiumacetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠(sodiumacetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。 1mol/LHEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。 1mol/LHCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/mlIPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。 100mmol/LPMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。 20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。 10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-freeRNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套) 5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。 10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。 100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制) 2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。 100×Denhardt试剂(Denhardt\'sregent) 依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。 10×标准DNA连接酶缓冲液(standardDNAligasebuffer)(粘端、平端连接) 将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃。 100mmol/LdNTP溶液(dNTPsolutions) 可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。 10mmol/LdNTP混合液 20%PEG8000/2.5MNaCl 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。 20×SSC 溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。 DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水 加100ulDEPC于100ml水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。 甲酰胺(deionizedformamide) 直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。 磷酸缓冲液(phosphatebuffer)
按照下表所给定的体积,混合1mol/L的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1mol/L
的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L
磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。
TE(用于悬浮和贮存DNA)
Tris缓冲液(Tris-HClbuffer)
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液
5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液
染料
1%溴酚蓝(bromophenolblue)
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylenecyanoleFF)
溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidiumbromide)
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gelloadingsolutions)
6×碱性凝胶上样液(室温贮存)
6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)
6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)
三.常用培养基
LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
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