鉴别
(1)取本品2ml,加浓氨试液调 pH值至9~10,用正丁醇2ml振摇提取,取正丁醇液3滴,蒸干,滴加1%对二甲氨基苯甲醛硫酸溶液 1ml,置水浴上加热 1~2分钟,溶液显棕褐色或红褐色。
(2)取本品2ml,置水浴上蒸干,残渣用甲醇2ml溶解,作为供试品溶液。另取氯原酸对照品,加甲醇制成每 1ml中含 1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验,吸取上述两种溶液各 10μl,分别点于同一硅胶 G薄层板上,以氯仿—丙酮—甲酸(3:2:1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(3)取本品10ml,用醋酸乙酯振摇提取2次,每次5ml,合并醋酸乙酯液,蒸干,加甲醇 1ml溶解,作为供试品溶液。另取茵陈对照药材1.5g,加水30ml,回流 1小时,滤过,滤液用醋酸乙酯振摇提取2次,每次15ml,合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣用甲醇 1ml溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点干同一硅胶G薄层板上,以甲苯—甲酸乙酯—甲酸(6:4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;再喷二硝基苯脐乙醇试液,热风吹5~10分钟,分别置日光下和紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,日光下显相同颜色的斑点,紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点。
含量测定
对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品8mg,置50ml量瓶中,加水微热溶解,冷却至室温,加水稀释至刻度,摇匀,精密量取2ml,置 10ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得(每 1ml含绿原酸32μg)。
供试品溶液的制备 精密量取本品 1ml,加水4ml、5%氢氧化钠溶液5滴,摇匀,用醋酸乙酯振摇提取3次。每次4ml,弃去醋酸乙酯液,加稀盐酸5滴,摇匀,用醋酸乙酯振摇提取5次,每次4ml(或提取至醋酸乙酯层在365nm紫外光灯下不显蓝色荧光),合并醋酸乙酯提取液。蒸干,用水溶解残渣并转移至25ml量瓶中,用水洗蒸发皿数次,洗液并入量瓶中,放冷,加水至刻度,摇匀,即得。
测定法
精密量取对照品溶液及供试品溶液各5ml,分别置10ml量瓶中,加5%亚硝酸钠溶液 0.3ml,摇匀,放置6分钟,加10%硝酸铝溶液 0.3ml,摇匀,放置 6分钟,加5%氢氧化钠溶液4ml,用水稀释至刻度,摇匀,放置30分钟,照分光光度法(附录 Ⅴ B),分别存445nm和515nm的波长处测定吸收度,同时作空白试验。根据吸收度差值,计算出绿原酸的含量,即得。
本品每1ml含绿原酸(C16H18O9)不得少于 0.5mg。