小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察

实验目的

掌握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理

实验原理

小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。

实验原理

制备方法包括以下几个要点: 

1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处

2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上

3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象 

实验用品

1．材料：小白鼠 

2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子 玻璃吸管 10ml刻度的离心管 离心机 载玻片 盖玻片 显微镜 滤纸 擦镜纸 纱布 恒温水浴锅 

3．药品：0.01%秋水仙素 0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1） 2%柠檬酸钠 改良石炭酸品红

实验步骤

预处理→取股骨→冲洗骨髓→离心→低渗→离心→固定→离心→滴片→染色→观察 

1．预处理：实验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。 

2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净

3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取 10ml 2%柠檬酸钠，注射 器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中

4 ．离心： 1000r/min 离心10 min ,弃上清

5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中 

6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清

7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻 轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次

实验步骤

8. 离心： 1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液

9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干 

10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min

11. 观察：低倍———高倍