1. 匹配度大于多少时,可认为待测细胞系与标准细胞系具有相关性?
匹配度大于80%(EV值大于0.8)时,可认为待测细胞系与标准细胞系具有相关性
2. 某个小鼠细胞鉴定匹配到另一个小鼠细胞,一定是错误细胞系吗?
不一定。首先去数据库确认该细胞系有没有公开的位点数据,如果有数据,且数据与检测结果匹配不上,说明为错误细胞系。如果该细胞系没有公开位点数据,则不能完全肯定是错误细胞系。由于小鼠品系不多,都是近交系(即近亲交配),很容易出现同品系细胞相互匹配到的问题,需要根据细胞形态、功能、特异性marker等具体判断细胞正确性。
3. 没有STR位点信息的细胞怎么鉴定正确性?
综合细胞形态、种属鉴定、功能实验结果或特异性marker进一步确认细胞正确性。
4. 原代细胞需要做鉴定嘛?
由于原代细胞传代次数较少,一般不会选择STR鉴定进行溯源。且来源于同一个体的杂细胞也无法通过STR鉴定来区分。因此鉴定原代细胞正确性和纯度常选择免疫荧光、流式等方法检测特异性marker。
5. 做STR可以判断种属的交叉吗?
若人源细胞中掺杂了大量其他种属细胞,则可以在STR峰图中看见波浪形或锯齿形的杂峰;若人源细胞中掺杂了少量其他种属细胞,STR鉴定可能无法判别,需要用CO I种属鉴定等其他方法进一步确认。若小鼠细胞掺杂了人源细胞,可以被鉴定出来;若小鼠细胞掺杂了除了人以外的其他种属细胞,杂细胞量较大时可以判别,杂细胞量较小时可能无法判别。
6. 为什么有的小鼠细胞做了STR鉴定,但却说只能鉴定出种属?
这些小鼠细胞系的位点信息还未录入数据库,没有可以比对的数据,所以检测结果不能确定是哪个小鼠细胞系。这些细胞经过小鼠STR基因检测,确实测出了位点数据,这说明该细胞是小鼠细胞,并且没有掺杂人的细胞。然而此时STR鉴定只能起到确定种属的作用。
7. 数据库中没有位点信息的细胞系可以做STR鉴定吗?做了有什么意义?
人、小鼠细胞可以做。其他物种的STR基因在开发中。
没有位点信息的细胞系做STR仍然是有意义的:
1.STR检测可以起到鉴定种属正确性的作用,
2. 首次引入细胞时检测的STR位点信息可以作为今后的参考:在细胞长期培养后若发现细胞特性改变,可重新检测STR基因,与首次引入时检测的数据对比。
8. 什么时候需要做STR鉴定?
当实验室引入新的细胞株,而供者未提供相关鉴定
当细胞经过较长时间培养,发现细胞形态、功能等特性发生较大改变
当怀疑实验室保藏细胞时发生错误标记时
9. 同一种细胞在不同细胞库的位点信息怎么不一样?
细胞在漫长的传代过程中可能发生基因突变,因此不同实验室保存的细胞具体位点可能略有差异;另外,即使是同一个细胞库保存的细胞,在不同检测环境下也可能会有部分位点差异。所以包括ATCC DSMZ ECACC在内的大型细胞库,相同的细胞都可能会有位点差异,根据国际细胞鉴定委员会(ICLAC)制定的细胞STR鉴定标准,细胞系的匹配度≥80% 时,认为它们具有相关性,即衍生于共同的祖先细胞。