巨细胞病毒IgM抗体检测标准操作过程

[前言]巨细胞病毒（CMV）亦称巨细胞涵体病毒。由于感染的细胞肿大并具有巨大的核内包涵体而命名。CMV在人群中感染广泛，是最常见的先天性感染病毒，其通过胎盘侵袭胎儿，引起宫内感染，临床表现为肝脾肿大、血小板减少、溶血性贫血，甚至引起畸形或死胎。由于CMV引起的先天畸形常在生后几个月-几年中表现症状，主要为智力低下。因此，检测CMV对优生优育学有重要意义。检测抗-CMV•IgM近期感染的诊断。            
[原理]本试剂盒先用吸收液去除IgG，再检测人血清或血浆中的抗-HSV-Ⅱ•IgM，消除假阴性。具有简便、快速等优点。 
[试剂厂家]深圳市绿瀚生物技术有限公司                   
[试剂盒组成]
1、包被板条                                                    
2、定标液                                                    
3、阴阳对照血清                 
4、酶结合物                     
5、底物
6、显色液
7，终止液
8，洗涤液
9，吸收液                         
[试剂的稳定性与贮存]试剂自生产日起避光贮存于2-8℃,有效期内稳定。     
[标本的收集与处理]标本为无溶血血清。          
[操作步骤]                      
1，样本稀释：用血清稀释液1：41稀释定标液、质控、血清，取稀释定标液、质控、血清150ul于另一管中，加吸收液150ul，彻底混匀，室温（21-25℃）静置20+/-5分钟。
2，加样：取包被板，加入吸收稀释定标液、质控、血清样本各100ul。并设空白对照一孔，室温（21-25℃）静置20+/-2分钟。甩去，加洗涤液一滴，蒸馏水洗涤5次，拍干。
3，反应：加酶结合物100ul，室温（21-25℃）静置20+/-2分钟。甩去，每孔加洗涤液一滴，蒸馏水洗涤5次，拍干。
4，显色：每孔加底物和显色液各100ul，室温（21-25℃）静置10+/-2分钟。以阳性对照出现明显蓝色为准。
 
[结果判定]                 
1、目测法：在白色背景下观察各孔颜色，明显兰色为阳性，无色或极淡兰色为阴性。
2、酶标仪检测（选择波长450nm）：每孔加终止液一滴，用空白孔校零，测定各孔OD值。
临界值（C.O.）=2.1×阴性对照OD值
（1）样本OD值S/C.O.≥1.0判为阳性；
（2）样本OD值S/C.O.＜0.9判为阴性。
（3）样本OD值S/C.O.介于0.9与1.0之间，判为可疑，需重复检测。
注：（1）当阳性对照/阴性对照OD值≥5时，试验结果有效；
（2）阴性对照OD值小于0.05时，按0.05计算；大于0.05时，按实际值计算。 
[质量控制]
为确保测试结果准确可靠，每批测试均应放置阴阳性质控血清与被检样品同时测试，用以检查试剂性能。
[注意事项]                 
1、不同批号的试剂不可混用。
2、试剂盒用前先平衡至室温。含血球的标本易出现假阳性，应避免使用。
3、未用完的板条应及时封存于易封袋中。
4、滴加试剂前，应将滴瓶翻转数次混匀。滴加时瓶身应保持垂直。
5、试剂盒置于2-8℃贮存，有效期6个月