常见免疫技术鉴析及化学发光纳米磁微粒（一）

免疫学的发展史

免疫学的发展史起始于微生物学研究，于18世纪建立，19世纪至20世纪中期进入经典发展期。这一时期，人们对免疫功能的认识由人体现象的观察进入了科学实验时期。

20世纪初期到中期，进入近代免疫学时期。从20世纪中期开始，真正进入现代免疫学时期。现代免疫学的检测基本历经了以下几个过程。

1960年前后

第一代免疫技术

放射免疫技术：利用放射性同位素作为标记物测量抗原抗体结合。

1970年前后

第二代免疫技术

酶联免疫技术：利用活性酶作为标记物的酶联免疫

1980年前后

第三代免疫技术

板式化学发光：非均相，微孔板，板界面反应，化学发光免疫技术

1990年至今

第四代免疫技术

纳米磁微粒管式化学发光：均相，管式，在溶液中反应，化学发光免疫技术

免疫检测原理

利用抗原和抗体的特异性反应进行检测，利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示，常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。免疫诊断在临床诊断中占据着非常重要的地位，常见的免疫技术有放射性免疫、酶联免疫、化学发光、电化学发光、纳米磁微粒化学发光。

放射免疫技术原理

使放射性标记抗原和未标记抗原（待测物）与不足量的特异性抗体竞争性地结合，反应后分离并测量放射性而求得未标记抗原的量。用反应式表示为：

*Ag为同位素标记的抗原,与未标记的抗原Ag有相同的免疫活性，两者以竞争性的方式与抗体Ab结合，形成*Ag-Ab或Ag-Ab复合物,在一定反应时间后达到动态平衡。

酶联免疫技术原理

简称ELISA法，它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。

使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。

在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。

由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度，ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。

化学发光免疫分析（CLIA）是一种高度敏感的微量测定技术，凡具有抗原性的物质（包括半抗原）都可以用CLIA测定。CLIA起步于80年代初，快速发展于90年代。

化学发光技术原理

利用化学反应释放的自由能激发中间体(常用碱性磷酸酶-金刚烷胺、辣根过氧化酶-鲁米诺衍生物、辣根过氧化酶-鲁米诺衍生物），使其从激发态回到基态。当中间体从激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而进行定量分析。

化学发光具有荧光的特异性，同时不需要激发光，避免了荧光分析中激发光杂散光的影响从而提高了灵敏度，并且避免了放射分析造成的环境污染和健康危害，是一种非常优秀的定量分析方法。

化学发光免疫分析（CLIA）是一种高度敏感的微量测定技术，凡具有抗原性的物质（包括半抗原）都可以用CLIA测定。CLIA起步于80年代初，快速发展于90年代。