| 实验材料 | 0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 平滑肌培养液 |
| 仪器、耗材 | Petri培养皿 手术刀和10号手术刀片 解剖剪 组织镊 |
| 实验步骤 | 1. 从小牛取胸主动脉。 2. 将胸主动脉浸入 Hanks 液。 3. 分离细胞之前将动脉放在冰上。 4. 将动脉放入 150 mm × 25 mm Petri 培养皿。 5. 用解剖剪沿长轴剪开动脉。 6. 用手术刀片轻刮动脉内腔面，以除去内皮细胞。 7. 将动脉的中膜与内膜和外膜分离。 8. 将中膜切成约 1 cm2 大小的组织块。 9. 将中膜组织块放入 60 mm × 15 mm Petri 培养皿，内膜侧朝下。 10. 让组织块贴壁约 10 min。 11. 直接在组织块上注 1 ml SMCM（平滑肌培养液（smooth muscle cell medium，SMCM）：DMEM 添加 20 % FBS，100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 链霉素）。 12. 将组织块放入湿润的培养箱，在 37°C 和 10% CO2 条件下孵育。 13. 第 2 天加入 5 ml SMCM，注意勿让组织块去附着。 14. 将组织块继续孵育 10 d。此后，平滑肌细胞从组织块迁移出来，并变为单层。 15. 细胞生长接近形成单层时，用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液传代。 |
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