幽门螺杆菌检测方法标准化的建议

【据《中华微生物学和免疫学杂志》2015年6月报道】题：2009-2014年浙江省苍南县就医患者幽门螺杆菌耐药性分析（作者陈秋玲等）

根据文中内容，提出以下问题进行商榷。

1. 该文作者判定H. pylori菌落为透明，不同于权威手册关于H. pylori菌落形态的描述。根据文献^［1］判定菌落的稠密性（density），分为不透明（opaque）、半透明（translucent）和透明（transparent），幽门螺杆菌（H. pylori）菌落在含血琼脂培养基上呈现半透明^［2］。该文作者应该指明所使用的培养基，并且描述H. pylori模式菌株ATCC43504菌落在该培养基上的形态特征。

2. 该文作者认为H. pylori革兰染色阴性，形态为弧形、S、V、或W形，结合氧化酶、触酶、脲酶阳性试验，判定为H. pylori。这种操作容易产生假阳性和假阴性错误的结果。

（1）假阳性：除了H. pylori以外，还有5个种也可以引起人类胃炎和溃疡^［3,4,5］，分别是Helicobacterbizzozeronii，Helicobacterfelis，Helicobacterheilmannii，Helicobactersalomonis和Helicobactersuis。这6个种的氧化酶、触酶、脲酶都为阳性，具体鉴别见表1^［4,5］。为了区别这6个种，建议增加硝酸盐还原试验、Indoxylacetate水解、42℃生长试验和鞭毛染色进行鉴别。如果结合形态把氧化酶、触酶、脲酶3个试验均为阳性的菌株判定为H.pylori，那么会存在其他5个种被鉴定为H. pylori的可能，这样易出现假阳性错误。

（2）假阴性：该文作者只鉴定典型形态的H. pylori，就会漏检非典型形态的H. pylori，从而发生假阴性错误。因为H.pylori除了典型形态外，在培养条件或者抗生素影响下还可以形成球状非典型形态^［1］。

以上两种情况尽管少见，但不能忽视其存在。

3. 该文作者用3天时间分离培养H. pylori，没有说明原因，且这样做可能会发生漏检。因为几乎所有的文献也包括最新版的Manualof Clinical Microbiology (11th edition)^［5］报告分离培养H. pylori需要72h以上，最好的方法是使用哥伦比亚琼脂培养基+马血分离培养2-10天，培养10天才能报告阴性结果^［5］，使用马血可能好于绵羊血。

4. 药敏试验标准化问题

该文作者报告使用5%新鲜脱纤维绵羊血+哥伦比亚琼脂培养基，应用琼脂稀释法进行药敏试验，结果判定依据CLSI药敏折点。但CLSI应用的是MH琼脂+5%陈旧绵羊血^［4,5］。应用不同的培养基可能会使药敏结出现偏差，该文没有报告比较两种培养基药敏结果数据，所以不能依据CLSI药敏折点判读药敏结果。并且该文作者接种2μl菌液，没有指明菌液浓度；如果菌液浓度不同，就可能不会有确定的MIC药敏结果。

5.该文作者没有进行质量控制试验，这样很难保证在5年内有很好的可比性试验结果。不论是H. pylori鉴定还是进行药敏试验，都应该选用ATCC菌株进行质控。如果不进行质控，实验结果会发生错误，试验结果不能报告临床，医生也不能依据实验结果进行治疗。

H. pylori是世界上引起各种胃炎、十二指肠球炎和消化性溃疡最常见的致病菌，也和胃癌、胃MALT淋巴瘤密切相关，H. pylori感染率可达50%以上，因此根除治疗H. pylori感染很有必要。为了预防和治疗H. pylori感染引起的疾病，进行H. pylori培养、药敏试验技术及耐药性监测研究有十分重要的意义。但要保证检测方法的标准化，才能更好地根除幽门螺杆菌感染。