徕卡荧光显微镜的荧光显微术的特点

荧光显微术是普通显微术的重大发展。它具有独特的优越性。荧光显微术是在黑暗的背景下观察标本的彩色图像，有良好的反衬，故观察清楚、方便，易于鉴别，眼睛也不易疲劳。由于荧光染色素的浓度极稀（仪1：100000）便能发出明亮的荧光，因此一般油机体众说是无毒的，为活体观察，如研究功能器官的过程和细微结构，某些代谢过程的变化等，提供了广泛的可能性。另外，荧光色素染色法比较简单，时间短，标本制作容易，特别适于快速工作，如传染病的快速诊断等。

（1）荧光显微术方法的选择徕卡荧光显微镜可用明场或暗场方法，—般用暗场效果较好，因为它产生的现场背景是黑的，图象反衬强，不过没有明场方便。至于透射荧光还是反射荧光，一般来说，反射荧光应用范围广一些，它不仅适用观察普通标本片，而且还能现察不适明标本。

根据激发光波长的特点，荧光显微术可用紫外光或紫蓝光激发。紫外光的特点在可观察机体组织的自体荧光（如核酸及金刚石等）在组织学工作中便于区别背景荧光和染色目标的荧光。但缺点是：常常会引起标本荧光的光致淬灭，标本难以重复观察，并且使显微摄影发生团难。另外对活体标本有叨显的杀伤作用，对长期从事这项工作人员的暇睛也有伤害。特别是对绝大多数的荧光色素来说，紫外区不是zui大的光谱吸收风因而不能得到先分的激发。而紫蓝光却没有以上—些缺点，但不足的是不能激发组织的自体荧光，因此不适于研究组织的白体荧光结构。对于个别荧光色素，知罗达明R200，可用波长更长的蓝绿光作为激发光为佳。

（2）结果记录方法徕卡荧光显微术所观察的荧光图象，主要以两个指标判断结果，一是形态学特征，二是荧光的亮度。在免疫荧光工作中，尤其是这样，必须将两者结合起来综合判断，不可偏废。结果记录是根据主观指标或客观指标，但一般常是凭工作者目力观察的主观指标由于这是定性的观察，所以记录的度较差。

随着科学技术的发展，采用客观指标记录结果已开始应用。

①用不同厚度的中性滤片插入激发滤片和标本之间的光路中，以看荧光减弱的极度；

②不同标本以相同的曝光时间进行显微摄影，然后用光密度计测定胶卷图象；

③直接用荧光计测荧光色素和兔疫荧光染色的镜下标本；

④用光敏电池曝光表测定图象的亮度，或者与扫描装置结合，对视场的特定部位进行扫描等，如荧光显微光度计。