在微生物实验室, 必须达到一定程度的无菌状态, 避免微生物污染。 假如在一个不洁的实验室或者早先打翻过样品的地方做微生物实验, 引入新的微生物污染样品的几率是很大的。
微生物的实验可以分为两大部分:前期准备和样品检验。
事实上,保持整个实验室清洁是非常重要的, 这样就不用在灭菌前担心太多了, 然而, 灭菌后必须保证样品或者培养基免受污染。其实, 可以把灭菌想像成”一扇门”, 在培养基中或者一些设备比如吸管的微生物都在灭菌过程中被杀死了,没有微生物困扰实验了。必须保证灭菌后的环境(门后的部分)的洁净, 杜绝灭菌后的培养基和设备受到污染。
一、无菌的重要性
要点 描述 原理 在压力下产生的湿热的蒸汽杀死微生物的营养体和孢子。 密封 灭菌锅必须密闭以阻隔外部空气, 避免空气的存在会影响压力并降低灭菌锅里面的温度。 灭菌压力 在灭菌锅内, 合适的灭菌温度是通过压力达到的, 压力对于灭菌没有效用但是使蒸汽温度上升。 对于标准操作来说,15lbs/inch2时的121℃并赶走所有空气可以达到灭菌的效果。 灭菌时间 当到达一定的温度和压力时, 需要保持一定的时间来达到效果,为了杀灭微生物,121℃必须保持至少15分钟。 培养基灭菌 大部分情况下, 实验室配置培养基后应灭菌,灭菌时应根据供应商指导, 使用合适的温度时间; 有些培养基不适合灭菌的。 器皿灭菌 当灭菌器皿时,需要考虑使用数量,比如,一天用10根吸管,在灭菌时, 一般就可以以10根为一包, 这样可以减低器皿在使用过程中遭受微生物的污染的可能性。 灭菌条 在灭菌过程中, 可以用灭菌条来监控效果, 灭菌条在灭菌前是有颜色的,灭菌后会变成黑色。 重新灭菌 假如一次灭菌无效, 可以重新进行灭菌过程, 但是,培养基是不可以进行第二次灭菌的, 应抛弃。 储存 灭菌完成后, 培养基和器皿应妥善储存。 一般来说, 培养基应存放于避光的洁净空间,同时应参照供应商的指示。 要点 描述 简述 物理分离方法, 使用高效过滤将微生物从液体培养基分离。 由于不需要加热和冷却过程,过滤比高温湿热灭菌省时间。 过滤头 0.2微米的过滤头可以分离所有的细菌营养体, 把它安装在针筒末端。 要点 描述
1. 无菌技术 – 高压湿热灭菌
2.无菌技术 – 过滤 (Filtration)
3.无菌过程注意点
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