快速了解冷冻含水超薄切片

　　冷冻超薄切片技术是在光学显微冷冻切片和电镜超薄切片的基础上发展起来的。由于常规超薄切片技术中应用化学固定、有机溶剂脱水、树脂包埋等一系列处理，均可使生物样品受到物理和化学性损伤，引起组织和细胞内蛋白质分子变性，大部分可溶性成分及某些生物大分子物质被抽提或发生移位。为了弥补这些缺陷，人们创造了冷冻超薄切片技术。70年代后，出现商品冷冻超薄切片装置，使该技术有了更大发展。目前，此技术可在分子水平上研究新鲜生物样品的超微结构、各种生物大分子和某些元素在细胞内的分布状态，并在细胞化学、免疫电镜、X射线微区分析及可溶性物质放射自显影研究等方面发挥巨大作用。

　　超薄切片技术主要操作程序：

　　1.样品预处理。包括两种方法:一种是样品直接冷冻固定，该法有利于保存生物样品中可溶性物质及生物大分子的活性、天然构型和保持元素的分布状态，主要用于生物样品内可溶性物质的放射自显影和X射线微区分析；另一种是对样品先采用戊二醛固定、冷冻保护剂浸泡等预处理，此法适用于细胞化学、免疫电镜等超微形态学研究。

　　2.快速冷冻固定。冷冻超薄切片质量的好坏直接决定于快速冷冻效果。常用的快速冷冻方式有二：一是液氮直接冷冻；二是金属接触冷冻。后一种方法较好，即将铜块先置于液氮中，待温度平衡后，将样品与铜块接触5～10秒钟，以达到快速传导降温的目的，然后再将样品置于液氮中待用。

　　3.切片。此步就用到关键器具——冷冻超薄切片机。该机是在固有型超薄切片机基础上附加低温操作装置组成的。

　　4.染色。冷冻超薄切片可采用正染色或负染色。