快速了解冷冻含水超薄切片

冷冻超薄切片技术是在光学显微冷冻切片和电镜超薄切片的基础上发展起来的。由于常规超薄切片技术中应用化学固定、有机溶剂脱水、树脂包埋等一系列处理,均可使生物样品受到物理和化学性损伤,引起组织和细胞内蛋白质分子变性,大部分可溶性成分及某些生物大分子物质被抽提或发生移位。为了弥补这些缺陷,人们创造了冷冻超薄切片技术。70年代后,出现商品冷冻超薄切片装置,使该技术有了更大发展。目前,此技术可在分子水平上研究新鲜生物样品的超微结构、各种生物大分子和某些元素在细胞内的分布状态,并在细胞化学、免疫电镜、X射线微区分析及可溶性物质放射自显影研究等方面发挥巨大作用。 超薄切片技术主要操作程序: 1.样品预处理。包括两种方法:一种是样品直接冷冻固定,该法有利于保存生物样品中可溶性物质及生物大分子的活性、天然构型和保持元素的分布状态,主要用于生物样品内可溶性物质的放射自显影和X射线微区分析;另一种是对样品先采用戊二醛固定、冷冻保护剂浸泡等预处理......阅读全文

快速了解冷冻含水超薄切片

  冷冻超薄切片技术是在光学显微冷冻切片和电镜超薄切片的基础上发展起来的。由于常规超薄切片技术中应用化学固定、有机溶剂脱水、树脂包埋等一系列处理,均可使生物样品受到物理和化学性损伤,引起组织和细胞内蛋白质分子变性,大部分可溶性成分及某些生物大分子物质被抽提或发生移位。为了弥补这些缺陷,人们创造了冷冻

聚焦离子束法制备冷冻含水超薄切片

  低温电子断层成像三维重构(cryo-ET)技术是发展结构生物学和细胞生物学重要的研究手段。该技术可以得到更真实的接近天然状态的细胞内部高分辨率的三维结构以及蛋白质大分子定位及相互作用的信息,是蛋白质组学研究的重要辅助手段被成为“可视化蛋白质组学”(Visual Approach to Prote

冷冻超薄切片术

中文名称冷冻超薄切片术英文名称cryoultramicrotomy;ultracryotomy定  义将低温冷冻标本在低温超薄切片机中制成供电镜观察使用的超薄切片的技术。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

冷冻超薄切片原理和使用

冷冻超薄切片技术是一种为了研究更接近于生物生活状态结构和功能而发展起来的电镜样品制备技术。它是把样品进行冷冻固定后,进行超薄切片,省去了经典超薄切片法的长时间的固定、脱水和也埋等处理。样励在切片前后,不经过强烈的化学处理,约胞结构能得到很好的保存;尤其是可溶性成分小会被抽提,使得电镜图像更接近于生物

冷冻超薄切片术技术简介

中文名称冷冻超薄切片术英文名称cryoultramicrotomy;ultracryotomy定  义将低温冷冻标本在低温超薄切片机中制成供电镜观察使用的超薄切片的技术。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

超薄切片技术

在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。

超薄切片的制备

制备超薄切片的设备为超薄切片机,使用的刀为玻璃刀或钻石刀。为了能切成薄片,包埋标本的包埋剂一定要达到一定的硬度,通常是用树脂聚合包埋。方法与步骤:锇酸和戊二醛固定样品→丙酮逐级脱水→环氧树脂包埋_→以热膨胀或机械伸缩的方式切片_→重金属(铀,铅)盐染色.

超薄切片技术简介

由于电镜产生的电子束穿透能力很弱,必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用,这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染

电镜超薄切片流程

超薄切片流程包括以下几个步骤: 1、切片前的准备:铜网清洗(用丙酮和乙醇浸洗) 2、支持膜制备:常用Formvar膜(用聚乙烯醇缩甲醛和氯仿配置,浓度为0.5%) 3、玻璃刀制备:专用制刀机制作。 4、半薄切片光镜定位(主要确定超薄切片的位置)。 5、修块(表面修成梯形或长方形)。 6、超薄切片:专

电镜所需的切片之超薄切片介绍

超薄切片(Ultrathin sectioning) 系供电子显微镜观察用的切片。由于电子穿透组织的能力低, 所以供电子显微镜观察用的切片要求极薄(一般厚度为40~50 nm) ,即为超薄切片  。

徕卡冰冻超薄切片技术

 徕卡冰冻超薄切片技术是使样品迅速冷冻,然后用冷冻切片机进行徕卡冷冻超薄切片。它省去了普通超簿切片法中繁杂的化学固定与包埋操作,在细胞化学研究中有着特殊的用途。为了很好保存形态结构,必须使游离水形成玻璃态的冰,防止产生冰晶。这就要求很高的冰冻速率(~度/秒),这对于传热性能差的生物材料来说是困难的。

超薄切片仪器的功能介绍

超薄切片(Ultrathin sectioning) 系供电子显微镜观察用的切片。由于电子穿透组织的能力低, 所以供电子显微镜观察用的切片要求极薄(一般厚度为40~50 nm) ,即为超薄切片 。

冷冻切片操作

1.冷冻切片机要始终处于运行状态,即使在不做冷冻切片时也要开着致冷,不能时开时关,以免影响机器寿命。2.手术取下的新鲜组织不要固定,因固定过的组织不利于切片,而且还会影响染色。3. 用OCT做包埋剂,起到支撑的作用。先将OCT标在固定头上再将组织放在OCT上,OCT不要太多,以免流到固定头外,组织表

超薄切片取材的基本要求

组织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种酶的作用,出现细胞自溶现象。此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷:(1).动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2

石蜡切片与冷冻切片的区别

1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组 织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片, 而那些稳

冷冻切片应用特点

(1)在手术进行中,突然发现病人的病变与原诊断,原定手术方案不相符合,或者怀疑时,需要病理确定。(2)了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞,或者转移的程度,以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。(3)对于已确定为恶性肿瘤的患者,则需要了解其手术范围是否足够,上下切缘是否有残存的肿瘤组织。(

冷冻组织切片制作

实验试剂液氮,干冰,1%明胶,4%多聚甲醛,PBS,含1%NP-40的PBS,3%BSA/PBS稀释抗体,辣根过氧化物酶标记的二抗,DAB/金属盐试剂,3%过氧化氢,0.3%(W/V)氯化镍贮存液,Harris苏木精,乙醇实验设备载玻片,Whatman 1#滤纸,低倍光学显微镜实验材料未受损伤的组织

超薄切片机仪器的功能介绍

超薄切片机制作供透射型电子显微镜用的超薄切片的切片机。它可将各种包埋剂包埋的样品用玻璃刀或钻石刀切成50纳米以下的超薄切片。

超薄切片仪器取材的基本要求

组织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种酶的作用,出现细胞自溶现象。此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷:(1).动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2

冷冻切片技术实验及冷冻切片机的基本操作

实验目的1 掌握冷冻切片的方法2 掌握冷冻切片的用途实验原理 冷冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度并通过冰起支撑作用来进行切片的一种方法。速冻 可减小冰晶直径,避免组织细胞损伤。制冷 压缩机佛里昂制冷、半导体温差电制冷 实验材料 新鲜动物肝脏实验方法 1 准备 将仪器 打开,样品台温度调至-4

冷冻组织切片的制作

实验概要本实验介绍了冷冻组织切片制作的基本操作流程。主要试剂液氮,干冰,1%明胶,4%多聚甲醛,PBS,含1%NP-40的PBS,3%BSA/PBS稀释抗体,辣根过氧化物酶标记的二抗,DAB/金属盐试剂,3%过氧化氢,0.3%(W/V)氯化镍贮存液,Harris苏木精,乙醇主要设备载玻片,Whatm

冷冻切片的应用介绍

(1)在手术进行中,突然发现病人的病变与原诊断,原定手术方案不相符合,或者怀疑时,需要病理确定。(2)了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞,或者转移的程度,以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。(3)对于已确定为恶性肿瘤的患者,则需要了解其手术范围是否足够,上下切缘是否有残存的肿瘤组织。(

冷冻切片仪器应用介绍

以Shandon As 620 E型恒温箱冷冻切片机为例,该机的箱面上有电子控制板,装有即时冷冻键和除霜键,启动即时冷冻键,机器马上进行工作状态,并可持续10mins。启动即时除霜键,可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉,并可持续15mins。有照明键一个,启动该键可照明工作间,有利工作及观察组织的

石蜡块做超薄切片的样品制作流程

石蜡块做超薄切片的样品制作流程如下: 1、取材:从石蜡块上相应部位切下约1mm3 的小块。 2、溶蜡:将取下的标本放在一张滤纸上,40℃烘箱内烘1小时,然后转放入二甲苯溶液中40℃烘箱内继续浸泡8—12h。 3、水化:纯丙酮30分钟、90%、80%、70%丙酮各15分钟。 4、漂洗:用缓冲液漂洗(0

透射电镜超薄切片和染色实验

实验步骤1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下:(1) 标本材料要新鲜,取材速度要快:由于生物组织离体后,细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶,使其微细结构发生改变而产生假象,故要尽量保持材料的新鲜,经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内,以尽量保持细胞在活体状态的结构。(2) 取材小,

透射电镜超薄切片和染色实验

实验方法原理 实验步骤 1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下:(1) 标本材料要新鲜,取材速度要快:由于生物组织离体后,细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶,使其微细结构发生改变而产生假象,故要尽量保持材料的新鲜,经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内,以尽量保持细胞在活体状态的结构。

透射电镜生物制样超薄切片

  这是一个为电镜观察提供极薄(约为60nm)的样品切片的过程,它是整个制样程序的中心环节。大部分生物样品只有被切割成超薄切片的形式才能在电镜下进行观察。能否提供理想的超薄切片关系到能否进行电镜观察,以及能否有令人满意的观察效果。在此以前的环节都是为了能给切片提供一个合格、切割性好的样品,而最后的染

透射电镜超薄切片和染色实验

实验步骤1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下:(1) 标本材料要新鲜,取材速度要快:由于生物组织离体后,细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶,使其微细结构发生改变而产生假象,故要尽量保持材料的新鲜,经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内,以尽量保持细胞在活体状态的结构。(2) 取材小,

石蜡切片与冷冻切片的区别是什么

1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组 织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片, 而那些稳

石蜡切片与冷冻切片的区别是什么

1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片,而那些稳定的