戊型肝炎抗IgM定性检测作业指导书

1.检验目的
HEV所致戊型肝炎的临床症状和流行病学特点和甲型肝炎相似，是一种自限性急性肝炎。孕妇感染HEV有较高的重症肝炎发生率。抗HEV抗体检测所用抗原为合成多肽或克隆表达的融合蛋白，抗原序列多选自基因开放读码框架ORF2和ORF3区。抗HEV抗体IgM阳性表示急性期感染，在潜伏末、出现临床症状之前即可检测到，并在症状最典型期达到峰值，持续时间约1个月。抗HEV抗体IgM产生不久，即可检测到抗HEV抗体IgG，并紧随抗HEV抗体IgM之后达到峰值，持续约1年。对HEV感染的确诊还可结合其他相关手段，如酶免疫印迹技术、HEV RNA检测等。
2.方法原理
采用 ELISA架桥法：用抗人μ链抗体包被微孔板，以捕捉待测血清中IgM，再加HEV抗原（HEVAg）与特异性IgM反应，最后加酶抗HEV抗体，使底物呈色。
3.性能指标
此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度0.5ng/ml。
4.标本收集
4.1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。
4.2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。
4.3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。
4.4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管
4.5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。
4.6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。
5.分析系统
5.1分析仪器：为美国BIO-RAD公司提供的MODEL550型酶标仪，仪器校准请参见仪器操作规程。
5.2分析试剂：为珠海丽珠集团提供的配套的HEV抗原试剂盒，规格为48test/盒，2-8℃贮存，有效期12个月；在效期内使用试剂。
5.3质控试剂：为珠海丽珠集团提供的配套的HEV抗原试剂盒中所附带的阴、阳性对照，2-8℃贮存，有效期12个月每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。
6.操作方法
6.1样品孔加入待测血清50μl。
6.2封板，置37℃孵育30分钟。
6.3手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。
6.4每孔加入酶标抗体1滴，置37℃孵育20分钟。
6.5手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。
6.6每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37℃ 孵育才10分钟。
6.7每孔加入1滴终止液终止显色反应。
6.7用酶标仪读数，数值取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。
7.质量控制操作程序
7.1每次实验设阴性、阳性各2孔，并设空白对照1孔随常规标本一起检测。
7.2质控结果登记到本年度的“免疫室定性检测项目室内质控登记表”。 
7.3一旦发现失控，应即时查找和分析原因，并在该结果栏作详细的批注和记录解决的过程；失控情况处理及原因分析详见8“失控处理”。
7.4每月进行质控小结。并将原始数据打印和存盘留档。
8.失控处理操作程序
8.1失控情况处理：操作者在分析质控结果时，如发现质控违背了控制规则，应填写失控报告单，上交专业室主管（组长），由专业室主管（组长）做出