测序实验流程:
扫描电镜技术 扫描电镜是用极细的电子束在样品表面扫描,将产生的二次电子用特制的探测器收集,形成电信号运送到显像管,在荧光屏上显示物体。(细胞、组织)表面的立体构像,可摄制成照片。
扫描电镜样品用戊二醛和饿酸等固定,经脱水和临界点干燥后,再于样品表面喷镀薄层金膜,以增加二波电子数。
电子显微镜下的纤维扫描电镜能观察较大的组织表面结构,由于它的景深长,1mm左右的凹凸不平面能清所成像,故放样品图像富有立体感。
扫描电镜的主要特征如下:
(1)能够直接观察大尺寸试样的原始表面;
(2)试样在样品室中的自由度非常大;
(3)观察的视场大;
(4)图像景深大,立体感强;
(5)对厚块试样可得到高分辨率图像;
(6)辐照对试样表面的污染小;
(7)能够进行动态观察(如动态拉伸、压缩、弯曲、升降温等);
(8)能获得与形貌相对应的多方面信息;
(9)在不牺牲扫描电镜特性的情况下扩充附加功能,如微区成分及晶体学分析。
扫描电子显微镜的主要结构
1.电子光学系统:电子枪;聚光镜(*、第二聚光镜和物镜);物镜光阑。
2.扫描系统:扫描信号发生器;扫描放大控制器;扫描偏转线圈。
3.信号探测放大系统:探测二次电子、背散射电子等电子信号。
4.图象显示和记录系统:早期SEM采用显象管、照相机等。数字式SEM采用电脑系统进行图象显示和记录管理。
5.真空系统:真空度高于 10 -4 Torr 。常用:机械真空泵、扩散泵、涡轮分子泵。
6.电源系统:高压发生装置、高压油箱。
扫描电子显微镜,简称扫描电镜、SEM可以应用于多个领域,例如:
(1)生物:种子、花粉、细菌……
(2)医学:血球、病毒……
(3)动物:大肠、绒毛、细胞、纤维……
(4)材料:陶瓷、高分子、粉末、环氧树脂……
(5)化学、物理、地质、冶金、矿物、污泥(杆菌) 、机械、电机及导电性样品,如半导体(IC、线宽量测、断面、结构观察……)电子材料等。
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