技术讲解：细胞融合的方法及诱导物

同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并，称自发融合;异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合，称诱发融合。

仙台病毒法融合

①两种细胞在一起培养，加入病毒，在4℃条件下病毒附着在细胞

膜上。并使两细胞相互凝聚;

②在37℃中，病毒与细胞膜发生反应，细胞膜受到破环，此时需

要Ca2+和Mg2+，zui适PH为8.0一8.2;

②细胞膜连接部穿通，周边连接部修复，此时需Ca2+和ATP;

④融合成巨大细胞，仍需ATP 。

聚乙二醇（PEG）法

聚乙二醇（PEG）结构为：HOH2C（CH20CH2）nCH2OH，分子量大于200小于6000者均可用作细胞融合剂。PEG经高压灭菌后，与温热的Engle氏液混合。通常用分子量低于1000的PEG作融合剂zui好，50%PEG溶液能产生zui多杂交细胞。PEG溶液在pH6.0时细胞融合率zui高。

电融合法

在直流电脉冲的诱导下，细胞膜表面的氧化还原电位发生改变，使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂，进而质膜开始连接，直到闭和成完整的膜，形成融合体。

优点：融合率高、重复性强、对细胞伤害小;

装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像观察融合过程;

免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。

融合诱导物

细胞融合的诱导物种类很多.常用的主要有生物法用灭活的仙台病毒（Sendai virus），化学法如用聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）和物理法如电脉冲。目前应用zui广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不完全清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。动植物细胞融合方法不同，生物法利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。

自发条件下或人工诱导下, 两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合导致异核体（heterokaryon）的形成, 异核体通过细胞有丝分裂导致核的融合, 形成单核的杂种细胞。有性生殖时发生正常的细胞融合, 即由两个配子融合成一个合子。

细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体，单克隆抗体可以用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物，具有准确，高效，简易，快速等优点。