拭子病毒采样及运输试剂盒兼容细胞培养设计引物的原则

拭子病毒采样及运输试剂盒，兼容细胞培养（已分装）设计引物应遵循以下原则：

1.引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

2.避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

3.引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

4.引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

5.引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

6.引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。

7.引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。