指示剂法测定血清二氧化碳在全自动生化分析仪上的应用

　临床上二氧化碳的检测方法有多种，如：酶法、滴定法、电极法等，但要寻找一种稳定可靠、方便临床检测、价格便宜、又方便于全自动化生化仪检测的方法，并不很容易。随着二氧化碳测定方法学的改进及自动化分析仪的应用，磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶法(PEPC)曾被认为是一种较好的方法，但由于其干粉试剂复溶后稳定性较差和液体双试剂期较短，使用上受到一定限制。以前我们检测二氧化碳采用酸碱滴定法中会使用到指示剂酚红，目前我们采用浙江伊利康公司提供的指示剂显色法测定二氧化碳试剂盒，就是在滴定法测定二氧化碳的基础上改良应用于日立7060全自动生化分析仪上测定，结果比较满意，现报道如下：

1 材料和方法

1．1材料

1.1.1试剂 　伊利康公司提供得二氧化碳液体双试剂盒及配套得A、B标准液（批号：20030402，有效期：一年半）；北京中生公司提供的二氧化碳酶法干粉试剂盒及其配套标准（指号20030301）。

1.1.2仪器 　日立7.60全自动生化仪

1.2方法

1.2.1 试验原理 　根据H-H方程，PH值的高低主要取决于血清【HCO3】/[PCO2]的浓度比，当比色液的PCO2维持在0.5Kpa以下时，pH 值的高低主要取决于血清【HCO3】采用酚红指示剂显示，其吸光度在550nm左右处与血清[HCO3] 浓度成直线关系，与同样处理得NaHCO3标准液进行比较，可求出血清中HCO3得含量。

1.2.2试验参数 反应类型：终点法；波长：546nm；反应温度;37℃；试剂量;RI;150μl，R2;150μl；样品量：15μl；每次校准前，将标准液A和B等量混匀，作为浓度为25mmol/l的应用标准液。

2 结果

2.1 重复性试验 取两份高低浓度得血清标本，做批内重复测定；n=20, 均值=35.6,s=0.35,cv=1.65%；均值 =13.8,s=0.38,cv=1.95%.另取质控血清做天间测定，n=25,均值 =27.5,s=1.09%,cv=4.2%.

2.2 回收试验 取已测得二氧化碳浓度为21.5mmol/l得血清标本，分别加入等量浓度分别为25mmol/l、12.5mmol/l得标准液进行回收试验，平均回收率为99.1％。

2.3干扰试验 取一份二氧化碳浓度为25mmol/l得血清分别用胆红素溶液及血红蛋白溶液做干扰试验。结果：胆红素145μmol/l的干扰值为9.1％，胆红素小于100μmol/l对测定值几乎无干扰。

2.4试剂的稳定性观察 为了验证该试剂的稳定性，我们将该试剂敞口保存在日立7060生化仪试剂仓内，两个月内试剂的空白吸光度几乎无变化，也即每两个月采用标准液校准一次完全不会影响临床标本结果的标准性。

2.5 标准曲线 按本法测定，二氧化碳浓度在（0－45）mmol/l范围内线性良好，回归方程和相关系数分别为Y=0.975x+0.755(x为理论值，y为测定值)，相关系数为0.9855。

2.6方法比较 本法（y）与磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶法（PEPC）单试剂（x）回归方程为y=0.251+0.992x,r=0.985,n=40, 经配对t检验，p＞0.05，两者无显著性差异。

2.7 参考值 对我院门诊健康体检人员100人采用本法测定血清二氧化碳，得到本实验室的参考值为：21.8－29.2mmol/l.

3 讨论

3.1 在全自动生化分析仪上采用指示剂显色法测定血清二氧化碳，是在手工滴定法测定二氧化碳的基础上经过改进应用于全自动生化分析仪上的，因此，与磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶法（PEPC）干粉试剂测定血清二氧化碳比较，比色法试剂价格更便宜，稳定性更好（酶法干粉试剂复溶后，一天内试剂的空白吸光度变化就很大，一天可能校准几次），减少了校准次数，所测结果满意。

3.2根据其测定原理，反应液中PH值的高低直接影响测定结果。在采用全自动生化仪测定时，样本管、反应杯等均应为中性，最好采用原血清管测定，而不将血清吸入样本杯测定；目前真空负压管的广泛使用，无疑使标本的污染率大大降低。另外，在设定试剂加样次序时，尽量安排在中性试剂之后，比如：不能安排在总蛋白和白蛋白试剂之后。当然，若采用手工法测定，所用吸管、比色杯等也应为中性。
3.3本方法所用校准液必须是试剂盒配套的标准液，而不能采用酶法或其它校准液。我们采用北京中生公司生产的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶法(PEPC)干粉试剂盒内的校准液来代替指示剂法试剂配套的校准液，所测样本结果将偏高。

3.4从上述结果可以看出，用该试剂所测结果批内及天间重复性都很好，从干扰试验结果可以看出，溶血标本对结果影响较大。这要求我们采集样本时，必须保证样本不溶血，血清分离后尽快测定。高胆红素对其结果影响甚微，同时，经试验，500mg/dl的甘油三脂对结果也几无影响。在方法比较试验中，与AVL-OPTI血气分析仪法比较，r=0.985,p＞0.05，无显著性差异。可见，该法准确性可靠，重复性好。经我科临床试用，检测效果较好，值得同行推广应用。