支原体培养实验——支原体半固体培养基接种法

实验方法原理	一、标本采集支原体常侵及人和动物的粘膜表面，一般可用棉花拭子涂抹取样后放入2~3 ml支原体液体培养基的小管中，或取其分泌液，若标本是组织块，可在灭菌乳钵或玻璃匀浆后接种，取样后应尽快接种培养。二、分离培养混种法：在制备半固体培养基时，培养基加热溶化，温度降至50℃时，添加动物血清、酵母浸液及青霉素后混匀，待冷却至37~40℃时，用无菌滴管吸取标本0.5~1 ml加入培养基中，充分混匀，凝固后置37℃孵育。三、结果观察绝大多数支原体为兼性厌氧，少数在含10% CO₂和相对湿度80~90%的大气环境中生长良好。支原体生长缓慢，多数于3~4 d长出菌落，少数于1~2 w方长出典型菌落，在平皿固体培养基上生长的菌落呈"油煎蛋"状，边缘不整齐。
实验材料	肺炎支原体
试剂、试剂盒	糖酵解培养基基础培养基牛血清酵母浸液酚红醋酸铊青霉素
仪器、耗材	培养皿烧杯玻璃棒天平移液管离心机棉花拭子培养箱
其他	一、附录糖酵解培养基（肺炎支原体培养基）基础培养基 70 ml 马（或牛血清） 20 ml 25%酵母浸液 10 ml 0.4%酚红 0.5 ml 1%醋酸铊 2.5 ml 青霉素10000 IU/ml 5.0 ml 调pH 7.8 展开