凝胶填料它能作为有机溶剂去分离嗜脂性分子,而且分离的效果很不错,能保持十几年不变,所以对于进行凝胶层析分离样品时,有很重要的作用,所以对于它的选择也是不可忽视的。分析一下在选择凝胶填料时候的注意点,如下:
1、凝胶的颗粒粗细与分离效果有一定的直接关系。一般来说,细颗粒分离效果好,但流速慢;而粗颗粒流速快,但会使区带扩散,使洗脱峰变平而宽。所以,如果要用细颗粒凝胶宜用大直径的层析柱,用粗颗粒时用小直径的层析柱。在现实的实际操作中,要根据工作需要,选择适当的颗粒大小并调整流速。
2、选择合适的凝胶填料种类以后,再根据层析柱的体积和干胶的溶胀度,计算出所需干胶的用量,其计算公式如下:
干胶用量/g=πr2h/溶胀度(床体积/g干胶)
考虑到凝胶填料在处理过程中会有部分损失,用上式计算得出的干胶用量应再增加10%-20%
3、混合物的分离程度主要决定于凝胶颗粒内部微孔的孔径和混合物相对分子质量的分布范围。和凝胶孔径有直接关系的是凝胶的交联度。凝胶孔径决定了被排阻物质相对分子质量的下限。移动缓慢的小分子物质,在低交联度的凝胶上不易分离,大分子物质同小分子物质的分离宜用高交联度的凝胶。
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