早期胚胎培养及形态学观察实验

实验方法原理 鸡胚胎发育可分为两个阶段：成蛋阶段的发育与成雏阶段的发育。1、胚胎在卵形成过程中的发育即母体内的发育，是成蛋阶段的发育。这个阶段的发育过程是：受精卵→卵裂→囊胚期→原肠期。当胚胎发育到原肠期时，已分化形成内胚层和外胚层，从外观上看形如一个圆盘状体即为胚盘，当卵排出体外，因温度下降，胚胎生长发育随即停止。2、胚胎在孵化过程中的发育卵排出体外后，保存在18℃以下的环境中，胚胎发育基本处于静止状态。当入孵后，胚胎即开始发育。胚胎在孵化过程中发育的时期称孵化期。鸡的孵化期为21天。种蛋入孵后，胚在原肠期形成的同时，上胚层像个碟状圆盘，在其末端，细胞不断地向中线集中，形成一条细胞带，称原条。原条细胞通过原沟的底部逐渐转人外胚层与内胚层之间，并分别向两侧扩展，这些位于内外胚层之间的细胞称为中胚层。原条细胞也逐渐转入外胚层与申胚层之间，并分别向前伸展，伸展的结构称为头突，后发育成脊索。脊索是胚胎期的纵轴支持器官，最终为脊柱所代替，随着胚胎的不断发育，由外、中、内三个胚层逐渐形成各种腺体、器官、骨骼、肌肉、皮肤、羽毛和喙，最后形成新的机体——雏鸡。

试剂、试剂盒 固定液生理盐水胭脂红染液

仪器、耗材 培养箱深瓷碗 弯头直头小剪刀、尖头手术镊子吸管 培养皿

实验步骤

1、胚胎培养：不同受精时间受精鸡蛋，注明日期和时间，置入温箱，其温度应保持在37 ℃～38 ℃之间，温箱内放半杯水，以保持适当之温度。

2、胚胎提取：每组（6人）取不同孵化时间（3天、7天、10天）鸡蛋各2个，置入温水内（最好生盐食盐水）轻轻滚动，待其自由静止时，胚盘即位于上部，在温水中用尖镊子将露出水面之蛋壳轻轻击破，用镊子剥去卵壳，使全部胚盘露出，用弯头剪刀沿圆形胚盘边缘剪一圆圈（为防止蛋白滚动，胚盘反转，可用吸管将蛋白吸出一部分），用尖镊子将胚盘移至培养皿内，生理盐水洗数次，并将胚盘下面粘连之卵黄及胚上的卵黄膜在盐水中摆脱。用吸管将盐水吸出，胚盘平贴在培养皿底上，固定 5 ～ 10分钟。

3 、染色将胚胎浸入硼砂胭脂红液内染 20分钟。

4、 制作鸡胚裱片，将胚盘直接裱于玻片上，吸去过多水分。