时空分辨单细胞测序技术的临床应用中，样本处理的质量控制方法有哪些？

在时空分辨单细胞测序技术的临床应用中，样本处理的质量控制方法包括以下几种：

1. 细胞活性检测

• 使用台盼蓝染色或荧光染料（如碘化丙啶）结合流式细胞术来评估细胞的活性，确保活细胞比例符合要求。

2. RNA 完整性评估

• 采用琼脂糖凝胶电泳或生物分析仪（如 Agilent Bioanalyzer）检测 RNA 的完整性，观察 RNA 条带的完整性和清晰度。较高质量的 RNA 应具有清晰的 18S 和 28S 核糖体 RNA 条带，且 28S:18S 的亮度比值约为 2:1。

3. 细胞计数和浓度测定

• 使用血细胞计数器或自动细胞计数仪准确测定细胞数量，并调整细胞浓度至适宜的范围，以保证测序数据的质量和深度。

4. 污染物检测

• 定期对实验试剂、耗材和操作环境进行检测，防止微生物、核酸酶等污染物的存在。

5. 重复性测试

• 对同一样本进行多次独立处理和分析，评估结果的重复性和稳定性。

6. 阳性和阴性对照设置

• 包括已知质量良好的样本作为阳性对照，以及模拟处理但不含目标细胞或核酸的样本作为阴性对照，以验证实验流程的有效性和排除假阳性或假阴性结果。

7. 测序数据的预分析

• 在正式分析前，对测序得到的原始数据进行初步评估，如碱基质量分布、测序深度、reads 比对率等，确保数据质量符合后续分析的要求。

8. 监控关键指标

• 记录样本处理过程中的关键参数，如处理时间、温度、试剂使用量等，并监控这些指标是否在规定范围内。

通过综合运用这些质量控制方法，可以最大程度地保证时空分辨单细胞测序技术在临床应用中样本处理的质量和可靠性。