月旭公司为您提供全套“罗丹明B”检测方法

　　 前段时间，据《重庆商报》报道，接国家工商总局、卫生部等4部委联合通知，重庆市工商、质监等部门抽查当地火锅底料等调味品质量后发现，王牌麻辣鱼调料等5个厂家10个批次的调味产品都含有工业染料“罗丹明B”（商品名为“玫瑰红B”），这些调味产品多为麻辣调味料。

　　一．“罗丹明B”简介

　　 据了解，问题火锅底料里查出的工业染料“罗丹明B”主要来自生产底料所用的豆瓣里。加入这种物质后的豆瓣色泽红润，卖相好，很吸引消费者。“罗丹明B”（商品名为玫瑰红B）为工业染料，又称若丹明B，是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。英文名Rhodamine B.分子量479.0175。罗丹明B在溶液中有强烈的荧光, 用作实验室中细胞荧光染色剂、有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。曾经用作食品添加剂，但后来实验证明罗丹明B会致癌，现在已不允许用作食品染色。

　　二．月旭的全套解决方案

　　1.适用范围

　　适用于辣椒面中罗丹明 B的测定。

　　2.提取

　　精确称取1g 辣椒面于50 mL聚丙烯离心管中，加入20 mL丙酮：正己烷（20:80）混合溶液，300 rpm振荡10 min，4000 rpm离心5 min，转移上清液于50 mL离心管中，残渣重复提取一次，合并上清液，于40℃氮吹至10 mL左右，待净化。

　　3.净化

　　预处理：向Welchrom Alumina-N（500mg/6mL）中加入5 mL丙酮：正己烷（20:80）混合溶液，流出液弃去；

　　上样：将上述提取液加入柱中，流出液弃去，此时，含罗丹明B的样品在柱上部会出现鲜亮的粉红色的荧光条带，条带边缘清晰，粉红色随含量的增加而加深和加宽，不含罗丹明B的样品提取液不会出现粉红色条带，只会出现黄红色的界面不清晰的宽带；

　　淋洗：加入含有20%丙酮的正己烷溶液淋洗SPE柱，可见柱体上的黄红色条带下移，直到黄色条带洗出柱体为止；

　　洗脱：5 mL甲醇：水（90:10）洗脱（不同活度的氧化铝选择的洗脱液不一样，Welchrom Alumina-N为Beckman Ⅰ级，采用纯甲醇洗脱时，需要大量的洗脱液才能将罗丹明B 洗脱下来，故在此加入10%的水以提高洗脱强度）；

　　重新溶解：采用90%甲醇水溶液定容至5 mL，过0.22μm滤膜，装瓶待分析；

　　4.检测

　　色谱条件：

　　色谱柱： Topsil C18 液相色谱柱（4.6 mm x 250 mm, 5 μm）

　　流动相： 甲醇：水=75:25

　　流速： 1 mL/min

　　进样量： 20 μL

　　柱温： 40°C

　　检测波长： 554 nm

　　运行时间：11 min

　　5.结果

　　回收率和重现性实验

　　将空白辣椒面上述方法处理后，分别添加一定量的标准溶液，添加浓度分别为0.2 mg/kg、0.5 mg/kg、2 mg/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验，共3个批次（样品典型回收率色谱图见附图）。

　　6.附图

　　辣椒面中添加0.5 mg/kg 罗丹明B色谱图

　　Welchrom Alumina-N上样后图片

　　本方法中使用到得耗材：

　　1.固相萃取小柱 Welchrom Alumina-N 500mg/6mL (P/N:WSAN010605)

　　2.色谱柱：Topsil, 4.6*250 mm，5μm(P/N: Tp5B18425)

　　3.13mm，孔径0.22μm尼龙针孔滤膜(P/N: WEL-SFNY213022)