染色体的标本制作及其组型实验2

3.3.5. 磷酸缓冲液:
1/15 mol/L Na2HPO4•12H2O: 2.39g 溶于100ml双蒸水中。
1/15 mol/L KH2PO4 0.907g 溶于100ml双蒸水中。
取1/15 mol/L Na2HPO4•12H2O液80ml、1/15 mol/L KH2PO4液 20ml混合即为pH=7.38之磷酸缓冲液。
如用无水Na2HPO4配制磷酸缓冲液，还可用以下方法配制；
A液:
Na2HPO4 9.47g
双蒸水 1000ml
B液:
KH2PO4 9.06g
双蒸水 1000ml
根据下表中所示比例即可配制出不同pH值的磷酸缓冲液。
表1 磷酸缓冲液配制比例
pH值 A液(ml) B液(ml)
5.8 7.8 92.2
6.0 12.0 88.0
6.4 26.5 73.5
6.6 37.5 62.5
6.8 50.0 50.0
7.0 61.1 38.9
7.2 71.5 28.5
7.4 80.4 19.6
3.3.6. 0.3% KCl水溶液（低渗液）。
4.实 验 方 法
4.1 染色体标本的制做
取小白鼠注射秋水仙素
↓14~16h后
断头法杀死，取睾丸洗净血污
↓
移入KCl的低渗溶液内将睾丸剪碎(呈乳白色)
↓铜网过滤至刻度离心管中
加入KCl低渗溶液于37℃水浴中低渗处理 30min（使细胞膨胀）
↓
800~1000r/min离心8min
↓轻轻地去除上清液
加入新配制的 Carnoy’s固定液，立即用吸管轻轻将细胞吹散
↓
室温固定8min
↓
800~1000r/min离心 8min
↓弃去上清液
加入新制Carnoy’s固定液，用滴管轻轻将细胞吹散，制成细胞悬液
↓
取出预冷的干净载玻片，以10~15cm高度滴加细胞悬液（细胞胀破）
↓
立即吹打载玻片
↓
多余的水分吸去后用文火烤干或空气干燥
↓
稀释Giemsa原液
Giemsa染色（倒置染色法，后有说明）30min
↓
用流水冲洗标本载玻片
↓
文火烤干显微观察
↓
选择染色好的分裂相染色体封片后油镜下进行显微照相
[附]：倒置染色法――在玻璃板上用废旧载玻片作支架, 使标本载玻片的标本面向下放置到支架上, 在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液，目的一可以节省染料，二可以避免染液快速挥发，三可以防止染色颗粒沉淀，影响观察。在操作时应注意，多个样品同时染色应摆放紧密，不要有间隙；滴染液时应尽量慢，不要有气泡，以免部分染色体不被着色。