核酸检测革命：rpa技术原理

　　重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。本专题为大家详细介绍RPA的原理、引物设计、疑难解答以及在致病菌检测、病毒检测以及癌症研究中的灵活应用。

　　自PCR技术诞生以来已经有三十年了，从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。很多人的实验根本离不开PCR。笔者曾经也接触PCR很长一段时间，加样、设置程序、等待、检测。这些过程看起来容易，但实验结果却总是会出人意料，很多时候根本不知道是哪里出了错。那么要是有一款技术，它比PCR更快速、便捷、高效，你会感兴趣吗？

　　RPA是什么？

　　基本原理

　　重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸（寡核苷酸引物）的重组酶、单链DNA结合蛋白（SSB）和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，zui适反应温度在37°C左右。

　　重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。