核酸纯度、浓度与分子量测定实验——Ethidiumbromide染色法

DNA

琼脂糖TBE电泳缓冲液TE buffer溴化乙锭（EB）载样缓冲液

电泳仪电泳槽电子天平移液器枪头点样板微波炉紫外分光光度仪凝胶图象分析仪

1.  称取1.5 g 琼脂糖加入盛有100 ml 0.5xTBE电泳缓冲液三角瓶中，摇匀，在微波炉上加热至琼脂糖完全溶解。加入溴化乙锭（EB）至终浓度0.5 ug/ml，并摇匀。 

2.  用胶带将制胶板两端封好，插入适当梳子，将溶解的琼脂糖倒入，室温冷却凝固。 

3.  充分凝固后撕掉两端的胶布，垂直向上小心拔出梳子，以保证点样孔完好。凝胶置入电泳槽中，加0.5xTBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1~2 mm。

4.  用移液器吸取DNA样品 8 ul 与 2 ul 的载样缓冲液混匀，小心加入点样孔，蓝色样品混合物将沉入点样孔下部。同时点10 ul DNA Marker作为分子量标准。 

5.  打开电源开关，调节电压至3-5 V/cm，可见到条带由负极向正极移动，约半小时后即可观察。 

6.  在凝胶图象分析仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准比较被扩增产物的大小；同时比较标准浓度及未知浓度的亮度，求取DNA 的含量。

1.  A260/A280>1.8表示DNA/RNA的纯度高。若数值<<1.8，表示纯度低，这时由OD260测得的DNA含量较不可信，核酸溶液中含有较多蛋白质，因此最好将前述所得核酸再重新抽取。

2.  测定260 nm 吸光值，OD=1.0代表值如下：

（1）ds DNA （double stranded DNA） = 50 mg/ml

（2）ss DNA （single stranded DNA or simgle-stranded RNA） = 40 mg/ml

（3）oligonucleotide = 33 mg/ml

3.  EB是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染环境。