梅毒的实验室检测方法（二）

2、梅毒螺旋体抗原血清学试验：常用的主要有梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)，梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)，梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA），化学发光免疫分析法（CLIA），还有如梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)，荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS），梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）。

TPHA：所用抗原为将梅毒螺旋体Nichols株经超声破碎后得到的可溶性抗原成分，用其致敏红细胞。同时用Reiter株制成吸收剂稀释血清，可将血清中的非特异性抗体吸收掉，以加强测定的特异性。

TPPA:测定原理基本上与TPHA类同，所不同的是TPPA所用的凝集颗粒为明胶，而非TPHA中的红细胞。用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒与血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异，是目前公认的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准。

TPPA试验原理示意图

ELISA:采用双抗原夹心ELISA法检测梅毒螺旋体特异性IgM和IgG抗体。将高纯度的特异抗原(通常含相对分子质量为5500、17000、44500、47000的蛋白质)包被于微孔反应板(条),待测血清中如存在抗TP抗体，即可与之结合。再加人酶标记的高纯度抗原，在固相上形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，待加人酶底物/色原(过氧化服ITMB)液时即产生呈色反应，用酶联检测仪判定试验阳性反应,呈色强度与抗体水平成正比。

本法可用于大样本血清检测,适用于自动化检测系统,是目前梅毒筛查的较好方法。

ELISA试验原理示意图

近年出现采用基因工程重组表达的特异性梅毒螺旋体抗原包被固相板，使试验更具有敏感性和特异性，具有简单、快速和高通量的优点，应是梅毒血清学诊断试验的首选方法，但在工作中常出现假阳性的问题,而大多数是由于弱阳性反应引起的。

CLIA：原来与ELISA相同，是在ELISA技术基础上发展而来，以多种梅毒螺旋体特异性蛋白(TpN15、TpN17和TpN47)为固相抗原，并用辣根过氧化物酶(HRP)标记同种蛋白为标记抗原，与患者血清中的梅毒螺旋体抗体形成双抗原夹心复合物，经洗涤，加入底物(发光剂)，根据发光强度(RLU)来判断患者血清中是否含有梅毒螺旋体特异性抗体。近年来推出的全自动化学发光法，具有简便、准确、经济的特点，且敏感性、特异性与其他常用方法结果相符合。

是放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）与酶联免疫分析（Enzymeimmunoassay，EIA）的结合，采用双抗夹心法的原理，使用化学发光底物取代传统的显色底物，增加了检测的灵敏度。

CLIA试验原理示意图

RT：一般常用的多是胶体金免疫层析(GICA)，是20世纪90年代初建立的一种简易快速稳定的免疫学检测技术，是使用胶体金作为标记物的一种固相膜免疫测定方法。采用纯化重组基因的梅毒抗原包被膜条测试区，加入待测血清后，血清中的抗体与膜条上金标记抗人IgG或抗IgM反应，然后通过毛细管效应层折至测试区与包被的特异抗原结合，在测试区出现紫红色条带为阳性。该法简便、快速，不需要特殊的仪器，适合于单人份操作，也适用于较紧急的场合。

有全血和血清、血浆法

全血法：

血清、血浆法：

FTA-ABS：方法是将梅毒螺旋体Nichols株抗原直接涂在载玻片上，然后将密螺旋体无毒株（Reiter株）制成吸收剂加至待测血清标本中反应30分钟，以去除同属抗原的交叉反应。再将吸收后的血清加到玻片的抗原膜上，37℃温育30分钟，用PBS缓冲液冲洗晾干，再加荧光素标记的抗人IgG，37℃温育后冲洗，晾干，最后在荧光显微镜下观察结果。

本试验由于吸收试剂的使用，提高了测定的特异性，可达92%。由于使用的是梅毒螺旋体Nichols株抗原，密螺旋体各种抗原分子均存在，提高了试验的敏感性，对一期梅毒的敏感80%，二期为99-100%，三期为95-100%。

FTA-ABS的结果观察

WB：将梅毒螺旋体Nichols株菌体细胞破碎，使用凝胶电泳将梅毒螺旋体各种抗原成分转印到膜条上作为固相，膜条与待测血清和酶标抗体孵育,底物显色后,当血清中存在梅毒特异性抗体时,则在印迹膜上相应的特异性多肽抗原位置出现显色条带。

WB的试验结果：

四、两种血清学检测方法的比较

非梅毒螺旋体抗原血清试验优点：1、非梅毒螺旋体血清试验阳性的患者往往是梅毒现症感染者，临床上即可开展治疗。2、非梅毒螺旋体血清试验可以作为疗效观察的指标。3、此类方法价格低廉，操作简便。

缺点：1、特异性：由于在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、静脉***者以及孕妇中均可出现反应素，所以此类试验有时会出现假阳性反应。2、敏感性：约1%-2%的二期梅毒病人出现前带反应现象导致结果假阴性。此外，由于反应素出现的时间晚于特异性梅毒螺旋体抗体，晚期梅毒或经过治疗后反应素可能转阴，这类试验对隐性梅毒也不敏感，因此，用此类试验进行梅毒筛查时，存在相当数量的漏检。

特异性梅毒螺旋体抗原血清试验优点：具有较高的敏感性和特异性。

缺点:成本较高，操作相对复杂，不能作为疗效观察指标，不能绝对排除假阳性。

正是由于各自有着不同的优缺点，所以对于梅毒的诊断治疗，一般都同时用两种方法进行检测。

梅毒血清学试验结果的临床意义