植物组织制备基因组DNA实验

植物组织

抽提缓冲液 十二烷基肌氨酸钠 TE 异丙醇 溴化乙锭 氯化铯

离心机

1.  收取10~50 g 新鲜的植物组织。

2.  植物组织用冷的无菌水洗涤、吸干，放人液氮中冻结，用研钵和研杵研成细粉。

3.  将冻结的细粉放入250 ml 的离心瓶中，立即加入抽提缓冲液约每克植物5~10 ml，轻轻搅拌混匀。

4.  加入十二烷基肌氨酸钠使终浓度达1%，于温育1~2 h。

5.  用JA-14转子4℃，5 500 g 离心10min 保留上清，必要时重复此歩骤以除去残渣。

6.  加人0.6体积异丙醇，混合，如果看不见沉淀，于-20℃放置30 min，用JA-14转子4℃，7 500 g 离心15 min，弃上清。

7.  沉淀用9 ml TE缓冲液重悬，加入9.7 g 固体氯化铯，混匀，冰上放置30 min，用JA-14转子，7 500 g 离心10 min，保留上清。

8.  加入0.5 ml 10 mg/ml 的溴化乙锭，冰上放置30 min，4℃ 7500 g  离心10min.

9.  将上清转入两个5 ml 的快封超离心管中，并封口。

10.  用VTi80转子20℃ 525 000 g 离心4 h，或20℃，300 000 g 离心过夜，用15号针头和注射器收集带。

11.  用氯化艳饱和的异丙醇重复抽提DNA以除去溴化乙锭。

12.  加入2体积水和6体积100%乙醇，混匀，-20℃放置1 h，用JA-20或JA-21转子4℃，7500 g 离心10 min。

13.  沉淀用TE缓冲液重悬，加入1/10体积的3 mol/l 乙酸钠和2体积的100%乙酵重悬，重复离心。

14.  沉淀晾干后用TE缓冲液重悬。