植物细胞骨架的光学显微镜观察

一、实验目的

了解细胞骨架的结构特征及其制备技术。

二、实验原理

细胞骨架（cytoskeleton）是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用。当用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可将细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用戊二醛固定，考马斯亮蓝 R250染色后，可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构，就是细胞骨架。

三、实验器材、药品

材料：洋葱鳞茎。

器材：普通光学显微镜、滴瓶、容量瓶、试剂瓶、烧杯、载玻片、盖玻片、镊子、小剪刀、吸水纸、擦镜纸。

药品：

（1）M缓冲液（加水定容到1000ml）

（2）磷酸缓冲液(pH 6.8)：0.2 mol／L 磷酸缓冲液，用NaHCO₃调至 pH6.8。

（3）1%Trion X-100：用M缓冲液配制.

（4）0.2％考马斯亮蓝R250：其溶剂为甲醇46.5ml，冰醋酸7ml，蒸馏水46.5ml。

（5）3%戊二醛：用0.2 mol／L磷酸缓冲液配。

四、实验步骤

1.取洋葱鳞茎切成大小约0.5cm2的块状，置磷酸缓冲液内浸泡3－10小时；

2.将浸泡后的鳞茎小块移动到1％的Trion X-100中处理30min；

3.用M-缓冲液洗3次，每次5分钟；

4.放入3％戊二醛中固定30分钟；

5.磷酸缓冲液洗3次，每次2min；

6.考马斯亮蓝染色30分钟；

7.水洗、铺展、装片、镜检。