气相色谱内标法测定食品中甜蜜素含量的解决方案

方案优势

本方法简便、快速、准确，具有较高的准确度、精密度和回收率，线性关系好，是一种非常可行的分析方法。

采用标准

GB/T5009.97-2003《食品中环己基氨基磺酸钠的测定》

方法/原理/步骤

　　试验部分

　　原理

　　在硫酸介质中甜蜜素与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱法进行定性和定量。

　　试剂(所用试剂不做说明皆为分析纯，水为蒸馏水)

　　 甜蜜素储备溶液：称取1.000 0g甜蜜素(含量≥99.0%)，加水溶解并定容至100mL，此溶液浓度为10.00mg/mL，为储备液。置于4℃的冰箱中。本次试验溶液浓度为：10.320 mg/mL

　　 甜蜜素标准使用溶液：取1.2.1储备液10mL，加水定容至100mL，为使用液，浓度为1.000 0mg/mL。本次试验使用溶液浓度为：1.0320 mg/mL

　　100g/L硫酸溶液：称取50g浓硫酸，用水定容至500mL。

　　 50g/L亚硝酸钠溶液：称取25g亚硝酸钠，用水定容至500mL。

　　 正己烷

　　 甲苯(内标)

　　 乙酸丁酯(内标)

　　 氯化钠

　　样品前处理

　　内标溶液的配置：在正己烷中加入一定量的内标(乙酸丁酯和甲苯)1，加入的量以出色谱峰合适为宜。一般为500mL正己烷中加入内标100μL～200μL。本次实验乙酸丁酯的浓度为0.1344mg/mL(称量0.0672g乙酸丁酯于装有10mL左右正己烷的25mL容量瓶中，再将溶液转移至500mL容量瓶中并定容至刻度线，摇匀，备用。　

    　标准溶液前处理：吸取上述标准溶液10 mL于50mL比色管中，加10mL水，摇匀，置于冰浴中。加入5mL50g/L亚硝酸钠溶液，5mL100g/L硫酸溶液，在冰浴中放置30min，并时常摇动，然后准确加入10mL溶剂，5g氯化钠，摇匀后振摇80次。静置分层。吸出正己烷层于10mL带塞离心管中进行离心分层(如有机溶剂和水相很快就有分层或只要进样针能吸出提取的溶剂，就可以不需离心分离这一步骤)，吸取正己烷层1μL注入色谱仪进行分析。算出校正因子。　

   　液体样品前处理：称取试样20.0g于50mL带塞比色管中，加10mL水。摇匀，置于冰浴中。处理过程同标准溶液前处理。吸取正己烷层试样1μL注入色谱仪进行分析。

　　固体样品前处理：称取已磨碎(剪碎)试样2.0～10.0g(根据样品中甜蜜素含量而定称取质量，使甜蜜素的量在1～10mg之间)于50mL带塞比色管中，加10mL水。一些样品不易溶解，如蜜饯类、山楂等，置于水浴锅中煮沸15min左右，冷却至60℃以下，置于冰浴中。处理过程同标准溶液前处理。吸取正己烷层试样1μL注入色谱仪进行分析。

　　结果与讨论

　　分析方法的线性相关性的测定

　　分别吸取标准溶液1mL、3mL、5mL、10mL、20mL于5个100mL容量瓶中，并定容至刻度，配成浓度分别为0.1032mg/mL、0.3096mg/mL、0.5160mg/mL、1.0320mg/mL、2.0640 mg/mL的标准溶液。分别吸取以上标准溶液10 mL于5支50 mL比色管中，按方法进行处理。每个标准点分别进样5次，每次进样1μL，以甜蜜素与内标物的质量比为横坐标，甜蜜素与内标物的峰面积比(取五次进样平均值)为纵坐标绘制标准曲线，得线性方程为y=0.43991x-0.00088，其线性相关系数为0.99999。　　求出相对校正因子及其平均值。

　　分析方法的准确度的测定

　　从市场上购买一种不含甜蜜素的饮料(样品名称：鲜橙多橙汁饮料生产单位：昆山统一企业食品有限公司净含量：2L生产日期：20060307)，称取5份一定量的试样，用移液管分别加入标准溶液1、3、5、10、15mL，按上述气相色谱操作条件测定甜蜜素回收率，结果都在99.7%～101.1%之间。

　　分析方法的精密度的测定

　　从市场上购买一种含有甜蜜素的饮料(样品名称：鲜橙多生产单位：康裕食品有限公司净含量：1.5L生产日期：20060415)，从同一产品中称取五个试样。按方法进行处理后，按上述气相色谱操作条件测定甜蜜素含量，得到标准偏差为0.0027，变异系数(RSD)为0.55%。

仪器设备

　　仪器

　　岛津GC-14C气相色谱仪(带FID检测器、毛细管进样口、N2000色谱工作站)DB-5毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)或其它类型毛细管柱，如DB-1、DB-1701

　　离心机

　　 10μL微量进样器

　　仪器操作条件

　　 检测器：200℃

　　汽化室：180℃

　　 柱温：70℃

　　载气流速(压力)：100kPa

　　氢气流速(压力)：50kPa

　　空气流速(压力)：60 kPa

结论

　　综上所述，本方法简便、快速、准确，具有较高的准确度、精密度和回收率，线性关系好，是一种非常可行的分析方法。