水体中大肠菌群的检测（二）

(三)平板培养试验

将初发酵实验中产酸产气的后只产酸或只产气的试管中的培养物用接种环取少许，划线接种在品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基平板上，为了确保获得分离的单菌落，须注意以下事项：

（1）划线间距至少相隔0.5厘米；

（2）接种钉尖端要稍弯；

（3）先对试管轻击并使之倾斜，以免接种针挑取到任何膜状物或浮渣；

（4）划线时要用针尖的弯曲部分接触琼脂培养基平面．以免刮伤或戳破培养基。划线后培养皿倒置，于37℃培养18～24h。

24h后，观察在平板上出现的单个菌落，其核心有深绿色金属光泽者为较典型的大肠菌群菌落。尽可能挑取典型的或接近典型的大肠菌群菌落，在营养琼脂斜面上划线，置37℃培养24h。挑取斜面培养物制成涂片，进行革兰氏染色，凡属革兰氏阴性杆菌，即确认了大肠菌群细菌的存在．

(四)复发酵验证实验

经上述经染色为革兰氏阴性的典型菌落，用接种环刮取部分接种于盛有乳糖培养基的试管中，在37℃培养24h，阳性反应者即确认为大肠菌群细菌。

结果计算

在初发酵试验中，可能有极少数能发酵乳糖产气的非大肠菌群细菌混在阳性可疑反应管中，通过对初发酵中的阳性可疑管进行平板和复发酵试验，并进行革兰氏染色和细菌形态的观察，可将那些少量的非大肠菌群细菌(“假阳性管”)删除去，故在记录时只能把三步试验都呈阳性的试管计入阳性反应管。

如果初发酵接种水样量为10mL、1mL、0.1mL，可直接查表求出原水样100mL中大肠菌群指数（MPN）。如果接种水样量低于上述水样量，则经下面的换算式计算。

目前我国系以1L水样中的菌数为报告值，即为MPN×10。
 

水样的总大肠菌群检索表